WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

Хузина Лилия Линатовна

Каталитическое циклоприсоединение диазопроизводных перспективных

фармаконов и природных соединений к С60-фуллерену

02.00.03 – Органическая химия

02.00.15 – Кинетика и катализ

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Уфа-2013

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте нефтехимии и катализа Российской академии наук

Научный руководитель: кандидат химических наук, Туктаров Айрат Рамилевич

Научный консультант: доктор химических наук, член-корреспондент РАН Джемилев Усеин Меметович

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор Зорин Владимир Викторович доктор химических наук, профессор Зайнуллин Радик Анварович

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт органической химии Уфимского научного центра РАН

Защита диссертации состоится « 18 » июня 2013 года в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д.002.062.01 в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте нефтехимии и катализа Российской академии наук по адресу: 450075, Уфа, проспект Октября, 141. Тел./факс: (347) 2842750. E-mail: ink@anrb.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института нефтехимии и катализа Российской академии наук и с авторефератом на сайте ВАК Министерства образования и науки РФ.

Автореферат разослан « 18 » мая 2013 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор химических наук Шарипов Г.Л.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Cо времени открытия С60-фуллерена, особенно с момента разработки препаративных методов его получения, химия углеродных кластеров исключительно активно и широким фронтом развивается и в настоящее время превратилась в самостоятельную ветвь органической химии. Интерес к фуллеренам и их функциональнозамещенным производным обусловлен возможностью широкого применения последних в самых различных областях науки и техники. При этом наибольшую перспективность и практическую ценность представляют производные фуллерена для медицины и современной техники. В соответствии с литературными данными функциональнозамещенные фуллерены обладают высокими антиоксидантными, противоопухолевыми и противовирусными свойствами, а также представляют интерес в качестве рентгеноконтрастирующих агентов. Одним из распространенных методов синтеза органических производных углеродных кластеров является реакция Бингеля-Хирша, основанная на циклоприсоединении генерируемых in situ -галогенкарбанионов к С60-фуллерену с образованием соответствующих метанофуллеренов. Альтернативным методом синтеза метанофуллеренов является термическое циклоприсоединение диазосоединений к углеродным кластерам. Однако главным недостатком данного метода является низкая селективность реакции и невозможность получения индивидуальных изомеров.

Несмотря на указанные недостатки с синтетической точки зрения реакция фуллеренов с диазосоединениями имеет наибльшую ценность, так как наряду с метанофуллеренами удается получать как гомофуллерены, так и пиразолинофуллерены.

С внедрением методов металлокомплексного катализа в химию фуллеренов, а именно, в реакции с диазосоединениями стало возможным получение каждого из указанных выше изомеров в индивидуальном виде. Все эти реакции были изучены на примере простейших диазосоединений.

К моменту начала наших исследований в литературе практически отсутствовали сведения, касающиеся селективного циклоприсоединения диазосоединений сложной структуры, синтезированных на основе фармакозначимых соединений, в том числе природных, к С60-фуллерену в присутствии металлокомплексных катализаторов.

Исходя из вышеизложенного, мы поставили перед собой задачу широкого использования металлокомплексных катализаторов в реакции С60-фуллерена с диазопроизводными известных и перспективных фармаконов, в том числе природных метаболитов с целью разработки эффективных методов ковалентного связывания биологически активных соединений с С60, что приведет, как мы предположили, к созданию потенциальных лекарственных средств нового поколения для лечения наиболее опасных заболеваний человека. Постановка подобной задачи является весьма актуальной, так как согласно литературным данным, известна способность молекулы фуллеренов снижать токсичность с одновременным пролонгированным действием биологически активных соединений в организме человека, а также эффективно и адресно доставлять фармаконы к больным клеткам.

Цель исследования. Разработка эффективных каталитических методов ковалентного связывания С60-фуллерена с диазопроизводными фармакозначимых и природных соединений, а также проведение биологических испытаний наиболее перспективных образцов синтезированных гибридных фуллереновых молекул.

Научная новизна. В работе получены следующие наиболее важные результаты:

Разработан эффективный метод ковалентного связывания С60-фуллерена с фармакозначимыми диазосоединениями, полученных последовательным ацилированием фармаконов различной структуры, содержащих гидроксильные группы, с помощью глицина с последующим диазотированием синтезированных соединений по аминогруппе. Полученные таким образом диазосоединения вводили в реакцию с С60фуллереном, катализируемую Pd(acac)2-PPh3-Et3Al.

Установлено, что в зависимости от соотношения исходных компонентов каталитической системы циклоприсоединение диазосоединений к С60-фуллерену проходит с образованием метанофуллеренов, либо термически стабильных пиразолинофуллеренов.

циклоприсоединение к С60-фуллерену диазоамидов различной структуры.

Показано, что диазоамиды, синтезированные на основе ацилированных глицином природных и синтетических фармакозначимых аминов различной структуры, в условиях каталитической реакции взаимодействуют с С60-фуллереном с образованием индивидуальных пиразолинофуллеренов. Наличие заместителя в -положении исходного диазосоединения приводит к образованию термически малостабильных пиразолинофуллеренов, которые легко превращаются в метанофуллерены.

В развитие проводимых исследований, на основе природных карбоновых кислот синтезированы соответствующие диазокетоны, которые легко циклоприсоединяются к С60-фуллерену в присутствии 20 мол.% трёхкомпонентной каталитической системы Pd(acac)2-PPh3-Et3Al с образованием гибридных молекул. В качестве модельных фармаконов в данной реакции выбраны кислота Тролокс и токоферилоксиуксусная кислота, проявляющие антиоксидантные и противоопухолевые свойства.

Впервые осуществлен синтез оптически активных метанофуллеренов каталитическим циклоприсоединением хиральных диазокетонов, синтезированных на основе оптически активных L- и D- -аминокислот, к С60-фуллерену под действием трехкомпонентного катализатора Pd(acac)2-PPh3-Et3Al. С использованием дериватизирующего реагента установлено, что оптическая чистота синтезированных циклоаддуктов фуллерена превышает 98%.

Проведены первичные фармакологические испытания наиболее перспективных образцов синтезированных гибридных молекул на основе фуллерена на антиоксидантные, противоопухолевые и противовоспалительные свойства.

Практическая ценность работы. Разработаны препаративные методы ковалентного связывания фармакозначимых диазосоединений с С60-фуллереном.

Проведен первичный биологический скрининг на противоопухолевую, противовоспалительную и антиоксидантную активность наиболее перспективных образцов синтезированных гибридных молекул на основе С60-фуллерена.

Апробация работы. Основные положения работы были представлены на International Symposium «Аdvanced Sciense in Organic Chemistry» (2010, Miskhor, Crimea), Международном симпозиуме «Химия алифатических диазосоединений:

достижения и перспективы» (2011, С.-Петербург), Joint International Conference «Advanced Carbon Nanostructures ACN'» (2011, St. Petersburg), XIX Мендеелевском съезде по общей и прикладной химии (2011, Волгоград), Всероссийской научной конференции (с международным участием) «Успехи синтеза и комплексообразования»

(2012, Москва), Всероссийской конференции «Органический синтез: химия и технология» (2012, Екатеринбург).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 5 статей, 6 тезисов докладов, получен 1 патент РФ и 2 положительных решения на выдачу патента РФ.

Объём и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения литературного обзора на тему «Реакции [2+1]-циклоприсоединения в синтезе биологически активных производных фуллерена», обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы ( наименования), изложена на 110 страницах машинописного текста, содержит 7 таблиц, рисунков.

Работа выполнена в соответствии с научным направлением Института нефтехимии и катализа РАН по бюджетным темам «Металлокомплексный катализ в химии металлорганических соединений непереходных металлов» (№ Гос. рег.

01.200.204378) и «Комплексные катализаторы в химии непредельных, металлорганических и кластерных соединений» (№ Гос. рег. 0120.0850048).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Каталитическое циклоприсоединение диазоацетатов на основе фармакозначимых соединений к С60-фуллерену В синтетической комбинации С60-фуллерена с биологически активными соединениями в качестве линкеров наиболее оптимально использовать важные для жизнедеятельности живых организмов биогенные аминокислоты или пептиды, т.е.

указанные молекулы должны быть соединены через сложноэфирные или амидные связи, которые будут устойчивыми при циркуляции гибридного соединения в крови или плазме и легко подвергаться гидролизу или амидолизу при попадании вещества в биологическую мишень.

В связи с этим за основу разрабатываемого метода ковалентного связывания фармакозначимых соединений с С60-фуллереном мы выбрали реакцию циклоприсоединения диазоацетатов к углеродным кластерам под действием катализатора Pd(acac)2-PPh3-Et3Al, осуществленную ранее в нашей лаборатории*.

С целью изучения возможности распространения указанного выше метода на диазосоединения, содержащие в эфирной группе фармакозначимые соединения стероидной структуры, на первом этапе мы изучили циклоприсоединение модельного диазоацетата на основе холестерина к С60 под действием катализатора Pd(acac)2-4PPh3Et3Al.

Установили, что в разработанных нами условиях (80оС, 1 ч, растворитель 1,2дихлорбензол, 20 мол% Pd-катализатора) образуется индивидуальный метанофуллерен в одну препаративную стадию с выходом ~50%. Синтез подобных карбоксипроизводных метанофуллеренов, в эфирной группе которых содержатся объемные заместители, с использованием известных методов удается осуществить лишь в несколько стадий.

Использование Pd-катализатора в количестве 20 мол.% является целесообразным, поскольку уменьшение количества катализатора до 5-10 мол.% снижает выход метанофуллерена 1, а его увеличение до 30 мол.% существенного влияния на выход целевого циклоаддукта не оказывает. Без катализатора селективность циклоприсоединения модельного диазосоединения к С60-фуллерену снижается, а именно, в ходе указанной реакции образуется смесь 6,6-закрытого и стереоизомерных 5,6-открытых аддуктов С60 с низкими выходами.

А.Р. Туктаров, А.Р. Ахметов, Д.Ш. Сабиров, Л.М. Халилов, А.Г. Ибрагимов, У.М. Джемилев. Изв.АН, Сер.хим., 2009, №8, 1671- N2CHC Структура циклоаддукта 1 надежно идентифицирована с помощью классических физико-химических методов анализа, а именно ЯМР, УФ, ИК-спектроскопия, а также масс-спектрометрия высокого разрешения.

Так, в спектре ЯМР 13С сигналы соединения 1 sp3-гибридизованных атомов углерода фуллеренового остова при С 70.87 и метинового углеродного атома С 39. м.д. (Н 4.74 м.д. в спектре ЯМР 1Н) однозначно свидетельствует об образовании циклопропанового фрагмента метанофуллерена 1, связанного с холестериновым остатком через карбоксильную группу (С 164.79 м.д.). Холестериновый фрагмент представлен в углеродном спектре 24 разрешенными сигналами в сильном поле, характерном для sp3-гибридизованных атомов холестерола С 12-57 м.д., карбинольным сигналом С 76.40 м.д. и двумя сигналами двойной связи С 123.66 и 139.09 м.д.

Фуллереновый остов характеризуется наличием в спектре 17 сигналов в области sp2гибридизованных углеродных атомов, свидетельствующих о наличии С2 симметрии в соединении 1.

Полученные нами положительные результаты в ходе изучения реакции С60 с диазоацетатами, в эфирной группе которых содержатся такие объемные заместители как холестерин, позволили нам надеяться на возможность распространения этого метода на другие диазосоединения, синтезированные на основе перспективных фармаконов различной структуры.

В качестве исходных фармакозначимых объектов исследования использовали токоферол и метиловые эфиры Тролокса, 20,29-дигидробетулиновой и урсоловой кислот, обладающих антиоксидантными, противоопухолевыми и противовирусными свойствами.

Показано, что при взаимодействии диазосоединений, полученных на основе вышеуказанных фармакофоров, с С60-фуллереном (мольное соотношение 5:1) в присутствии 20 мол.% трехкомпонентного катализатора Pd(acac)2-PPh3-Et3Al, взятых в соотношении (1:4:4) в условиях (80оС, 1 ч, 1,2-дихлорбензол) селективно образуются соответствующие метанофуллерены 2-5 с выходом 60-75%.

Не прореагировавший фуллерен С60 отделяли от целевых метанофуллеренов 2-5 с помощью полупрепаративной ВЭЖХ. Структуру индивидуальных 2-5 установили с привлечением одно-(ЯМР 1Н и 13С) и двумерных (HHCOSY, HSQC, HMBC) экспериментов ЯМР, а также масс спектрометрии MALDI TOF.

Учитывая, что при циклоприсоединении диазоацетатов к фуллерену С60 под действием каталитической системы Pd(acac)2-PPh3-Et3Al, взятых в соотношении компонентов катализатора 1:2:4, происходит преимущественное образование 5,6открытых циклоаддуктов, мы попытались осуществить взаимодействие упомянутых выше диазофармаконов с С60 в этих условиях, надеясь на получение соответствующих гомофуллеренов.

В результате обнаружили, что при взаимодействии (80оС, 1 ч) С60-фуллерена с диазопроизводными -токоферола и метилового эфира 20,29-дигидробетулиновой кислоты в присутствии катализатора Pd(acac)2-2PPh3-4Et3Al, вместо ожидаемых гомофуллеренов, получили метанофуллерены 2 и 3 и соответствующие пиразолиновые производные С60 6 и 7 с общим выходом 58 и 65% в соотношении ~ 1 : 1 (рис. 1а). С понижением температуры реакции до 60оС наблюдается преимущественное образование пиразолинофуллеренов 6 и 7 с выходами 35 и 41 % соответственно (рис. 1б). В случае диазосоединений, полученных на основе метиловых эфиров Тролокса и урсоловой кислоты, нам не удалось синтезировать соответствующие пиразолиновые производные С60-фуллерена с удовлетворительными выходами. Во всех этих опытах были получены соответствующие метанофуллерены 4 и 5, в которых содержание соответствующих [2+3]-циклоаддуктов не превышает 5%.

Рисунок 1 – ВЭЖХ хроматограмма продуктов реакции диазопроизводного метилового эфира 20,29-дигидробетулиновой кислоты с фуллереном С60 при 80оС (а) и 60оС (б) до разделения.

С помощью полупрепаративной ВЭЖХ нами были выделены индивидуальные пиразолинофуллерены 6 и 7. В масс-спектре MALDI TOF соединения 6, полученного в режиме регистрации отрицательных ионов, имеется интенсивный пик молекулярного иона, равный [M] = 1218.871, что соответствует структуре молекулы 6.

Проведенные одномерные (1Н и 13С) и двумерные (COSY, HSQC, HMBC) эксперименты ЯМР с соединением 6 также подтверждают наличие в молекуле последнего пиразолинового кольца, сопряженного с карбонильной группой. В продуктах реакции мы не обнаружили образование изомера 6’ (рис. 2).

Рисунок 2 – Изомерный пиразолинофуллерен 6’ Между тем, в соединении 6 наблюдается эффект -сопряжения C=N связи с карбонильной группой сложноэфирного фрагмента, что приводит к ее сильнопольному экранированию С (С=О) 160.34 м.д. в отличие от положения сигнала несопряженной карбонильной группы, например, в соединении 2 С (С=О) 164.25 м.д. Два sp гибридизованных углеродных атома С 77.44 и 88.84, а также слабопольный сигнал атома водорода Н (NH) 8.39 м.д. однозначно характеризуют строение соединения 6.

С целью расширения области приложения разработанного нами метода эффективного ковалентного связывания углеродных кластеров с биологически активными спиртами, мы изучили возможность распространения данной реакции на диазосоединения, синтезированные на основе конъюгатов природных соединений. Тем более, что в литературе практически отсутствуют сведения о получении подобных гибридных молекул в реакции с фуллеренами, тогда как ковалентное связывание биоконъюгатов, обладающих разнообразной биологической активностью, с молекулой фуллерена может привести к взаимному синергетическому влиянию.

Модельным объектом исследования нами выбран диазоацетат, синтезированный на основе конъюгата 20,29-дигидробетулиновой и -токоферилоксиуксусной кислот, обладающих противовоспалительными свойствами.

Показано, что при взаимодействии модельного диазосоединения с С60фуллереном (мольное соотношение 5:1) в присутствии 20 мол.% трехкомпонентного катализатора Pd(acac)2-PPh3-Et3Al (1:2:4) в условиях (80оС, 1 ч, о-дихлорбензол) селективно образуется метанофуллерен 8 с выходом ~30%. Увеличение продолжительности реакции до 5 ч не приводит к заметному повышению выхода (~31%) целевого циклоаддукта.

Образование [2+1]-циклоаддукта по 6,6-связи с закрытой структурой С подтверждается наличием характеристичного синглетного сигнала атома водорода при мостиковом углеродном атоме в спектре ЯМР 1Н соединения 8 при Н 4.81 м.д., который взаимодействует в эксперименте HMBC с циклопропановыми (С 70.88 м.д.) и sp2гибридизованными углеродными атомами фуллеренового остова, находящихся в положении к мостиковому углероду. Одновременно, в спектре ЯМР 13С соединения присутствуют сигналы всех углеродных атомов, относящихся к остаткам молекул тритерпеноида и хроманола.

Образование метанофуллерена 8 состава С123Н102О6 подтверждено также с помощью масс-спектрометрии MALDI TOF. Эксперименты проводились в линейном (TOF) и отражательном (TOF/TOF) режимах со съемкой положительных и отрицательных ионов, которые показали наличие молекулярного m/z 1674.303 (Мрасч= 1674.768) и низко интенсивного фрагментационного m/z 733.766 [C60CH]+ (Мрасч= 733.662) ионов.

Таким образом, разработан эффективный метод ковалентного связывания фармакозначимых соединений с С60-фуллереном, заключающийся во взаимодействии последнего с диазоацетатами, синтезированными на основе биологически активных спиртов, в присутствии каталитической системы Pd(acac)2-PPh3-Et3Al.

2. Циклоприсоединение диазоамидов к С60-фуллерену, катализируемое Pd(acac)2-PPh3-Et3Al Разработанный нами каталитический метод ковалентного связывания фармакозначимых соединений с фуллереном, основанный на циклоприсоединении к последнему диазоацетатов, позволил выдвинуть предположение о возможности проведения подобной реакции между диазоамидами и С60 в присутствии трехкомпонентного катализатора на основе Pd.

Учитывая, что к моменту начала наших исследований в литературе отсутствовали сведения о каталитическом циклоприсоединении диазоамидов к фуллеренам, на первом этапе наших исследований мы изучили взаимодействие С60-фуллерена с модельным диазоамидом, синтезированным на основе глицина и циклогексиламина.

Установили, что взаимодействие С60-фуллерена с 5 кратным избытком циклогексил диазоацетамида (80оС, 1 ч, растворитель – хлорбензол) под действием мол.% Pd(acac)2-PPh3-Et3Al (1:2:4) приводит к образованию индивидуального пиразолинофуллерена 9 с выходом ~40% в расчете на взятый в реакцию С60. Повышение температуры и продолжительности реакции до 100оС и 3 ч, соответственно, не приводит к заметному увеличению выхода целевого [2+3]-циклоаддукта 9. В отсутствие катализатора указанная реакция проходит с формированием смеси метано- и стереоизомерных гомофуллеренов, что соответствует литературным данным для термического циклоприсоединения диазоамидов к С60-фуллерену†.

A.Skiebe, A.Hirsch. J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1994, 335- Масс-спектр MALDI TOF индивидуального пиразолинофуллерена 9, выделенного с помощью препаративной ВЭЖХ, характеризуется интенсивным пиком молекулярного иона, равный [M+Н]+ = 888.112 (вычислено 888.114), а также фрагментационного иона – [C60N2H]+ = 749.033, что соответствует предложенной структуре.

Проведенные одномерные (1Н и 13С) и двумерные (COSY, HSQC, HMBC) эксперименты ЯМР с соединением 9 также подтверждают наличие в молекуле последнего пиразолинового кольца, сопряженного с амидной группой. Так, пиразолиновое кольцо представлено в спектре ЯМР 13С тремя сигналами, два из которых – sp3 гибридизованны и аннелированны с фуллереновым остовом (С 80.09 и 87.30 м.д.), а третий (С 136.23 м.д.) связан двойной связью с атомом азота пятичленного гетероцикла.

Спектр ЯМР 13С пиразолинофуллерена 9 характеризуется сильнопольными сигналами в области С 25-50 м.д., принадлежащие циклогексильному фрагменту (С 25.38 (2С), 26.05 (1С), 33.31 (2С), 49.08 (1С) м.д.), а также слабопольными сигналами, которые отвечают фуллереновому остову молекулы (25 сигналов в области С 137–149) и карбонильному углеродному атому (С 157.61).

С целью расширения области приложения разработанного нами метода каталитического циклоприсоединения диазоамидов к С60-фуллерену, а также изучения влияния размера и структуры заместителя в амидной группе исходного диазосоединения на выход и селективность образования целевых пиразолинофуллеренов, было изучено взаимодействие С60 со стерически затрудненными диазоамидами, синтезированными на основе глицина и анилина, либо адамантансодержащих аминов.

Установили, что в разработанных нами условиях (80 оС, 1 ч, Pd(acac)2:2PPh3:4Et3Al) С60 вступает в реакцию с указанными диазосоединениями (мольное соотношение 1:5), образуя соответствующие моноаддукты 10-13 с выходом 30-40%. При этом, как видно из схемы, наличие в амидной группе объемных каркасных соединений не влияет на ход и направление обсуждаемой реакции.

Известно, что пиразолинофуллерены, синтезированные в реакции С60-фуллерена с диазоацетатами или диазотиоатами, термически могут быть трансформированы в соответствующие метанофуллерены. При кипячении синтезированных нами [2+3]циклоаддуктов 9-13 в 1,2-дихлорбензоле в течение 100 ч образование соответствующих метанофуллеренов зарегистрировано не было, во всех опытах сохранялся исходный пиразолинофуллерен.

Наличие заместителя в -положении к диазогруппе исходного диазосоединения приводит к дестабилизации образующегося в ходе реакции пиразолинофуллерена и формированию соответствующих [2+1]-циклоаддуктов. В связи с этим мы изучили реакцию С60 с -замещенными диазоамидами, в надежде разработать селективный метод синтеза соответствующих метанофуллеренов. В качестве исходных диазосоединений были выбраны диазоамиды, синтезированные из -аланина, -лейцина или -метионина и циклогексиламина.

Установлено, что указанные диазоамиды вступают в реакцию с С60-фуллереном в разработанных условиях (40оС, 1 ч) в присутствии 20 мол.% трехкомпонентного катализатора Pd(acac)2-PPh3-Et3Al (1:2:4) с образованием исключительно метанофуллеренов 14-16 с выходом 40-50%.

14: R= Me (50%); 15: R= i-Bu (47%); 16: R= -(CH2)2SMe (40%) Структура индивидуальных метанофуллеренов 14-16 надежно установлена с помощью современных физико-химических методов анализа (одно- и двумерная ЯМР спектроскопия, ИК, УФ, а также масс спектрометрия MALDI TOF).

Так, наличие интенсивного пика в масс спектре MALDI TOF соединения 14 при 873.120 (вычислено 873.115) однозначно свидетельствует об образовании [2+1]циклоаддукта.

В спектре ЯМР 13С индивидуального соединения 14 наблюдается 27 сигналов в фуллереновой области 138-149 м.д., причем три из них имеют удвоенную интенсивность. Наличие плоскости симметрии в молекуле фуллероциклопропана приводит к двум сигналам для циклопропанового фрагмента, резонирующим при 78. м.д.. Мостиковый углеродный атом при 62.00 м.д. связан с метильной группой (17. м.д.), синглетный сигнал которой наблюдается в ЯМР 1Н при 2.54 м.д., а углеродный остов амидной группы резонирует при 165.95 м.д.. Полученные спектральные характеристики соответствуют образованию циклопропанового фрагмента, аннелированного по 6,6-связи фуллеренового остова.

Таким образом, нами впервые осуществлено каталитическое циклоприсоединение диазоамидов к С60-фуллерену под действием трехкомпонентной каталитической системы Pd(acac)2-PPh3-Et3Al, приводящее в зависимости от структуры исходного диазосоединения к образованию индивидуальных пиразолино-, либо метанофуллеренов.

3. Циклоприсоединение диазокетонов к С60-фуллерену под действием Pd(acac)2-PPh3-Et3Al В развитие проводимых выше исследований, направленных на разработку эффективных методов ковалентного связывания углеродных кластеров с современными фармакозначимыми соединениями, мы изучили каталитическое циклоприсоединение к С60-фуллерену диазокетонов, синтезированных на основе биологически активных карбоновых кислот.

В качестве модельного фармакона выбрали синтетический аналог -токоферола – кислоту Тролокс. В ходе получения исходного диазокетона 17 на основе Тролокса установили, что наилучшие выходы последнего достигаются при использовании бутилоксикарбонильной (Вос) защиты для гидроксильной группы, а наилучшим методом синтеза диазосоединения 17 является способ, основанный на использовании метода смешанных ангидридов. Схема получения диазокетона на основе кислоты Тролокс приведена ниже.

Взаимодействие С60-фуллерена с диазокетоном 17 в условиях (80оС, 1 ч, 20 мол.% Pd(acac)2-2Ph3P-4Et3Al) в хлорбензоле или 1,2-дихлорбензоле приводит к соответствующему метанофуллерену 18 с выходом ~40 %. В отсутствие катализатора указанная реакция проходит с формированием смеси метано- и стереоизомерных гомофуллеренов, что соответствует литературным данным для термического циклоприсоединения диазокетонов к С60-фуллерену.

Обработка соединения 18 трифторуксусной кислотой в сухом хлористом метилене через 2 ч приводит к омылению гидроксильной группы и образованию фуллероциклопропана 19 с количественным выходом.

Наличие свободной гидроксильной группы и хроманового фрагмента в соединении 19 дает надежду, что последнее проявит высокие антиокислительные свойства.

Учитывая, что результаты исследований последних лет выявили высокую противоопухолевую активность новых синтетических аналогов токоферола, а именно, негидролизуемых или медленно гидролизуемых эфирных аналогов -токоферола с редокс-пассивным хромановым фрагментом, то представляло интерес изучить возможность синтеза производных фуллерена, содержащих токоферилоксиуксусный фрагмент.

Поэтому на следующем этапе мы осуществили циклоприсоединение к С60фуллерену диазокетона, синтезированного на основе токоферилоксиуксусной кислоты с получением соответствующего метанофуллерена 20 с выходом ~37 %.

В развитие исследований по каталитическому циклоприсоединению диазокетонов к С60-фуллерену мы попытались вовлечь в указанную реакцию хиральные диазосоединения, надеясь на возможность осуществления селективного синтеза ранее не описанных оптически активных метанофуллеренов. Выдвинутую нами идею удалось реализовать на примере оптически активных диазокетонов, синтезированных на основе защищенных L- и D- -аминокислот.

В качестве исходного модельного объекта исследования использовали оптически активные энантиомеры L- и D-аланина, в которых аминогруппа защищена с помощью бутилоксикарбонильной (Вос) группы.

Установили, что при взаимодействии диазокетонов, полученных на основе указанных аминокислот, с С60-фуллереном (мольное соотношение 5:1) в присутствии мол.% трехкомпонентного катализатора Pd(acac)2-PPh3-Et3Al, взятых в соотношении (1:2:4) в условиях (80оС, 1 ч, хлорбензол) селективно образуются соответствующие метанофуллерены 21 и 22 с выходом ~77%.

Спектры ЯМР 1Н и 13С соединений 21 и 22 полностью идентичны. Наличие в спектре ЯМР 1Н синглетного сигнала в области Н 5.19 м.д., коррелирующего в спектре HMBC с карбонильным атомом углерода (С 199.84 м.д.), а также трех сигналов в спектре ЯМР 13С С 42.64, 71.73 и 71.97 м.д., принадлежащих циклопропановому фрагменту однозначно подтверждают структуру синтезированных циклоаддуктов 21 и 22. Метиновому и метильному атомам углерода принадлежат сигналы в спектре ЯМР С при С 56.41 (Н 4.95 м.д.) и С 17.43 м.д. (Н 1.78 м.д.) соответственно.

Структура соединений 21 и 22 также доказана с помощью масс-спектрометрии MALDI TOF. Спектры содержат интенсивные пики молекулярного иона, равный m/z 905.156 (вычислено 905.105).

С целью расширения области приложения разработанного метода синтеза оптически активных метанофуллеренов, а также изучения влияния структуры исходного хирального диазосоединения на ход и направление реакции, осуществлено циклоприсоединение оптически активных диазокетонов, синтезированных на основе Boc-защищенных L- и D-лейцина и метионина, к С60-фуллерену.

Установили, что в разработанных условиях (80оС, 1 ч) С60 взаимодействует с диазокетонами указанных аминокислот (мольное соотношение 1:5) под действием мол.% Pd(acac)2-2PPh3-4Et3Al, селективно образуя соответствующие метанофуллерены 23-26 с выходом 43-57%.

23 (~ 53%) В дальнейшем мы исследовали влияние дополнительных функциональных групп в аминокислотном фрагменте диазосоединения на выход и селективность образования целевых оптически активных метанофуллеренов на примере диазокетонов, синтезированных на основе L- и D-тирозина и лизина.

Показано, что С60 взаимодействует с указанными диазосоединениями (мольное соотношение 1:5) в условиях описанных выше в присутствии комплексного катализатора на основе Pd, образуя индивидуальные метанофуллерены 27-30 с выходом 30-50%. Как видно из схемы, наличие дополнительных функциональных групп в исходном диазокетоне, а также ароматического заместителя приводит к снижению выхода соответствующих циклоаддуктов.

27 (~ 30%) Структура синтезированных метанофуллеренов 27-30 надежно доказана с помощью современных методов анализа (одно- (1Н и 13С) и двумерная (HHCOSY, HSQC, HMBS) ЯМР спектроскопия, ИК-, УФ-спектроскопия, а также массспектрометрия MALDI TOF). При этом, как уже было отмечено ранее, спектральные характеристики синтезированных энантиомеров 27 и 28, а также 29 и 30 полностью совпадают.

С целью доказательства структуры оптически активного аддукта, а также установления энантиомерной чистоты синтезированных циклоаддуктов, на примере соединения 21 мы использовали дериватизирующий реагент сдвига, а именно, трис[3гептафторбутирил)-L-камфорато]европий (III), в мольных соотношениях [Eu] : [21] = 1:10 и 1:2.

Рисунок 3 – Спектр ЯМР 1Н соединения 21 без дериватизирующего реагента сдвига (а) и с дериватизирующим реагентом в соотношении [Eu] : [21] = 1 : 10 (б) и 1 : 2 (в).

Как видно из рисунка 3, дублетный сигнал метильной группы испытывает слабое уширение и небольшое смещение в области слабого поля от С (СН3) 1.76 м.д. до 1. м.д., тогда как атом водорода мостикового углеродного атома смещается в сильное поле от Н (СН) 5.27 м.д. до 5.20 м.д. Отсутствие дополнительного расщепления перечисленных сигналов при добавлении дериватизирующего реагента свидетельствует о высокой энантиомерной чистоте (ее > 98%) полученного циклоаддукта 21.

К сожалению, все попытки измерить оптические углы вращения плоскости поляризации синтезированных метанофуллеренов с защищенными аминогруппами были безуспешными. Поэтому для более надежного доказательства стереохимии оптически активных метанофуллеренов мы обратились к методу кругового дихроизма (КД), который часто применяется при изучении оптически активных молекул, в том числе и производных фуллеренов.

Спектры КД растворов метанофуллеренов 21-30 получены в хлорoформе на автоматическом регистрирующем спектрофотометре СКД-2 (разработка Институтов молекулярной биологии и спектроскопии РАН).

Рисунок 4 – Спектры КД метанофуллеренов 21-30 в хлороформе с = 1.0 g/L.

Индуцированные эффекты Коттона (ЭК) в спектрах КД L-энантиомеров 21, 23, 25, 27, 29 и их D-антиподов 22, 24, 26, 28, 30 соответственно (рис. 4) оказались зеркально идентичными для всех наблюдаемых экстремумов в интервале длин волн 300нм, которые характерны для электронных - переходов производных фуллерена.

При этом ЭК оказались положительными для метанофуллеренов, синтезированных на основе L-аминокислот, и отрицательными для циклоаддуктов, полученных из Dантиподов.

Зеркальное отображение ЭК для спектров КД, выше представленных энантиомеров, являлось для нас ожидаемым, поскольку реакция между С60-фуллереном и диазосоединениями, синтезированными из указанных аминокислот, проходит без затрагивания асимметрических центров, следовательно, образующиеся энантиомеры должны сохранять стереохимию исходных хиральных соединений.

Снятие защиты функциональных групп в метанофуллеренах 21-30 с помощью CF3CO2H приводит к образованию циклоаддуктов 31-40 в виде твердого порошка, труднорастворимого в традиционных для фуллеренов и его производных растворителях (толуол, хлорбензол, 1,2-дихлорбензол, хлороформ, сероуглерод).

Вследствие низкой растворимости метанофуллеренов 31-40 нам не удалось зарегистрировать их спектры ЯМР 1Н и 13С. Поэтому структура этих циклоаддуктов установлена с помощью ИК-спектроскопии и масс-спектрометрии MALDI TOF.

Так, например, масс-спектр метанофуллерена 31, зарегистрированный в режиме положительных ионов с использованием в качестве матрицы S8, характеризуется интенсивным пиком молекулярного m/z 804.040 [M-H]+ (вычислено для [М]+ 805.053) и фрагментационного m/z 733.013 [С60СH]+ ионов.

Известно, что защита аминогруппы в оптически активной аминокислоте с помощью Boc-группы и ее расщепление CF3CO2H не приводит к их рацемизации. На основании вышеизложенного можно сделать вывод, что стереохимия исходных метанофуллеренов 21-30 должна сохраниться в аддуктах 31-40.

В случае соединений 31-40 нам не удалось зарегистрировать спектры КД их растворов в пиридине, однако омыление аминогруппы, связанной с хиральным центром, позволило измерить оптические углы вращения плоскости поляризации этих метанофуллеренов. При этом следует заметить, что в литературе описан всего лишь один положительный опыт по регистрации величины углов вращения для производных фуллеренов, полученный ранее в нашей лаборатории. Эксперименты проводились на поляриметре Perkin Elmer модель 341 с натриевой лампой при длине волны 589 нм в концентрации с 0.019 в растворе пиридина по 10 измерений (табл. 1).

Таблица 1. Удельные углы вращения []D20 метанофуллеренов 31- Усредненное значение Статистическая выборка в данном случае обусловлена низкой концентрацией растворов. Более высокие концентрации растворов соединений 31-40 имеют темную окраску и существенно поглощают при измеряемой длине волны, вследствие чего значение угла вращения более концентрированных растворов измерить не удалось.

Таким образом, нами разработан эффективный метод введения в С60-молекулу фуллерена фармакозначимых карбоновых и аминокислот, в том числе оптически активных, циклоприсоединением к фуллерену С60 соответствующих диазокетонов под действием трехкомпонентного катализатора Pd(acac)2-2PPh3-4Et3Al.

4. Изучение биологической активности синтезированных циклоаддуктов Разработка и внедрение новых высокоэффективных лекарственных препаратов на сегодняшний день является одним из приоритетных направлений не только современной медицины и фармакологии, но и технологической модернизации экономики России. При этом в последнее время особое внимание уделяется разработке систем адресной доставки действующего вещества к клеткам патологических тканей и органов. Учитывая обнаруженную способность фуллеренов и их производных целенаправленно доставлять биологически активные вещества к биологическим мишеням, весьма актуальным является получение производных фуллеренов, содержащих в своей структуре известные фармакофорные заместители. В связи с выше изложенным, в рамках данной работы синтезированы различные представители потенциальных биологически активных производных С60 и изучены их биологические свойства.

Исследование антиоксидантной активности Антиоксидантная активность С60-фуллерена лежит в основе одного из наиболее перспективных направлений его использования в медицине. Наличие в молекуле С электрон-дефицитной системы с системой сопряженных двойных связей приводит к тому, что исходный углеродный кластер охотно вступает в реакцию со свободными радикалами различной природы с образованием фуллеренильных радикалов, которые димеризуются или присоединяют дополнительное количество радикалов. Благодаря тому, что молекула С60 теоретически может связать 60 свободных радикалов, С60фуллерен получил название «радикальной губки». При этом наиболее ярко антиокислительная способность выражена у незамещенных С60-фуллеренов. Однако, низкая растворимость последнего приводит к невозможности его практического применения в медицине. В связи с этим мы предположили, что ковалентное связывание фуллерена с другими антиоксидантами может привести не только к увеличению растворимости исходного С60, но и увеличению его антиоксилительной активности.

Для подтверждения выдвинутой нами идеи мы изучили антиокислительные свойства аддуктов фуллерена 2 и 19, содержащих известные антиоксиданты, такие как -токоферол и кислоту Тролокс.

Изучение ингибирующих свойств аддуктов С60 2 и 19 проводили на известной модельной реакции инициированного окисления кумола. Окисление осуществляли в термостатированном стеклянном реакторе при 343±0,1 K при непрерывном перемешивании магнитной мешалкой. Скорость окисления кумола определяли по количеству поглощенного кислорода волюмометрическим методом (V=±0.02 мл).

Эффективность ингибирующего действия (fkIn) соединений 2 и 19 оценивали по степени снижения начальной скорости окисления кумола в результате добавления их растворов в бензоле. Полученные результаты сравнивали со стандартом, в качестве которого использовали незамещенный С60-фуллерен. Результаты исследования антиоксидантной активности приведены в таблице 2.

Таблица 2. Константы скорости ингибирования производными фуллерена 2 и окисления кумола л·моль-1·с- fkIn·- эффективная константа скорости ингибирования Из таблицы 2 видно, что аддукты фуллерена 2 и 19 более эффективно замедляют скорость окисления кумола, чем исходный С60-фуллерен, однако, следует заметить, что они менее эффективны исходных молекул Тролокса и -токоферола. Мы полагаем, что меньшая ингибирующея активность производных С60 2 и 19 по сравнению с Тролоксом и -токоферолом связана с высокой реакционной способностью фуллеренильных радикалов ROO-C60Tr• (ROO-C60Toc•), образующихся в результате присоединения к фуллерену кумилпероксильных радикалов ROO•. Фуллеренильные радикалы, атакуя субстрат – кумол, могут способствовать развитию новых цепных процессов, что нивелирует ингибирующий эффект аддуктов.

Таким образом, на примере окисления кумола показано, что ковалентное связывание С60-фуллерена с известными антиоксидантами приводит к увеличению антиокислительной активности исходного С60, но являются менее эффективными по сравнению с классическими ингибиторами – -токоферолом и Тролоксом. Однако, стоит отметить, что благодаря липофильности фуллеренов, определяющая мембранотропные свойства, аддукты С60 могут выполнять роль транспортного агента, доставляющего терапевтически активный фрагмент -токоферола или Тролокса к больному органу.

Исследование противоопухолевой и противовоспалительной активности Известно, что фуллерены и их производные, а также производные бетулиновой кислоты и токоферолы обладают ярко выраженной противоопухолевой активностью, однако, при этом, имеют разные механизмы действия. В связи с этим возникла идея создать такую химическую структуру, которая могла бы объединить в себе все три группы веществ, сохранив свойственный каждой из групп механизм противоопухолевого действия, что, в свою очередь, могло бы привести к усилению противоопухолевого эффекта каждого отдельного компонента или его амплификации.

Для реализации этой идеи нами были синтезированы гибридные соединения С60фуллерена и 20,29-дигидроаналога бетулиновой кислоты 3 и 7, либо токоферилоксиуксусной кислоты 20 и изучены их противоопухолевые и противовоспалительные свойства.

Протвоопухолевая активность изучалась на примере цитотоксического действия на клетки опухоли Р-815 и Эрлиха. Контролем служил показатель жизнеспособности клеток, культивированных без добавления каких-либо дополнительных соединений. В качестве вещества сравнения использовали метиловый эфир 20,29-дигидробетулиновой кислоты 3’ и токоферилоксиуксусную кислоту 20’.

Клеточные линии мастоцитомы Р-815 и карциномы Эрлиха поддерживали in vivo на мышах линии ВАLB/с (карцинома Эрлиха) и DBA/2 (мастоцитома Р-815) методом внутрибрюшинной трансплантации. Для изучения противоопухолевой активности опухолевые клетки помещали в плоскодонные 96-луночные планшеты (по 2.0х105/лунку), культивировали 2 суток (37°С, 5% СО2) в присутствии исследуемых веществ в различных разведениях. За 4 часа до окончания инкубации в лунки добавляли МТТ (бромид 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия). После окончания инкубации надосадок удаляли, осадок растворяли ДМСО и замеряли абсорбцию растворов при длине волны 550 нм с использованием спектрофотометра. Данные представлены в таблицах 3 и 4.

Таблица 3. Цитотоксическое действие (% жизнеспособности клеток) соединений 3, 7 и 20 на опухоль Р-815 (Х±SE).



Похожие работы:

«ИРИСХАНОВА Зазу Имрановна ЕСТЕСТВЕННАЯ ДЕНДРОФЛОРА ЧЕЧЕНСКОЙ РЕСПУБЛИКИ И ЕЁ АНАЛИЗ 03.00.05 – ботаника Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Астрахань 2009 2 Работа выполнена в ГОУ ВПО Чеченский государственный университет Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Иванов Александр Львович Официальные оппоненты : доктор географических наук, профессор Бармин Александр Николаевич кандидат биологических наук, доцент...»

«ИВАНКОВ ДМИТРИЙ НИКОЛАЕВИЧ ТЕОРИЯ СКОРОСТЕЙ СВОРАЧИВАНИЯ ГЛОБУЛЯРНЫХ БЕЛКОВ 03.00.02. – биофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва 2006 1 Работа выполнена в Институте белка РАН Научные руководители: доктор физико-математических наук, профессор Финкельштейн Алексей Витальевич Официальные оппоненты : доктор физико-математических наук Потехин Сергей Александрович доктор физико-математических наук,...»

«ПАРНОВА Татьяна Ивановна ВЛИЯНИЕ МНОГОЛЕТНЕГО ПРИМЕНЕНИЯ РАЗНЫХ ПО ИНТЕНСИВНОСТИ СИСТЕМ ОБРАБОТКИ, УДОБРЕНИЙ И ГЕРБИЦИДОВ НА АГРОФИЗИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПЛОДОРОДИЯ ДЕРНОВО-ПОДЗОЛИСТОЙ ГЛЕЕВАТОЙ ПОЧВЫ И УРОЖАЙНОСТЬ ПОЛЕВЫХ КУЛЬТУР Специальность 06.01.01 – общее земледелие АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Москва 2009 Работа выполнена на кафедре земледелия ФГОУ ВПО Ярославская государственная сельскохозяйственная академия...»

«ФЕДАШ Анатолий Владимирович Развитие методологии проектирования и обоснования функциональной структуры горнотехнических систем освоения георесурсного потенциала угольных месторождений Специальность: 25.00.21Теоретические основы проектирования горнотехнических систем Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Новочеркасск – 2013 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального...»

«Юнусова Елена Борисовна СТАНОВЛЕНИЕ ХОРЕОГРАФИЧЕСКИХ УМЕНИЙ У ДЕТЕЙ СТАРШЕГО ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА В ДОПОЛНИТЕЛЬНОМ ОБРАЗОВАНИИ 13.00.02 – теория и методика обучения и воспитания (дошкольное образование) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Челябинск – 2011 1 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждение высшего профессионального образования Челябинский государственный педагогический университет...»

«Попова Елена Юрьевна РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ ДЕКОНТАМИНАЦИИ И ДИАГНОСТИКИ СПЕЦИФИЧЕСКИХ МИКРОБНЫХ КОНТАМИНАНТОВ Специальность: 03.00.23 - Биотехнология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва 2008 1 Работа выполнена в Московском государственном университете инженерной экологии (МГУИЭ) на кафедре Экологическая и промышленная биотехнология. Научный руководитель : - Минаева Людмила Павловна, кандидат технических наук Официальные...»

«ЖИГАЛОВ Александр Юрьевич ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ АЛЬФА-АКТИВНОСТИ ЭЭГ ЧЕЛОВЕКА В КОНТУРЕ ИНТЕРФЕЙСА МОЗГ-КОМПЬЮТЕР 03.00.13 - Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2009 Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных Биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова (заведующий кафедрой – д.б.н., профессор А.А.Каменский). Научный руководитель : доктор биологических...»

«ИМБС Татьяна Игоревна ПОЛИСАХАРИДЫ И НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТАБОЛИТЫ НЕКОТОРЫХ МАССОВЫХ ВИДОВ БУРЫХ ВОДОРОСЛЕЙ МОРЕЙ ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА РОССИИ. СПОСОБ КОМПЛЕКСНОЙ ПЕРЕРАБОТКИ ВОДОРОСЛЕЙ. 02.00.10 биоорганическая химия Автореферат Диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Владивосток 2010 Диссертация выполнена в Тихоокеанском институте биоорганической химии Дальневосточного отделения Российской академии наук, г. Владивосток Научный руководитель : Звягинцева...»

«Титов Александр Андреевич ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ УГЛУБЛЕНИЙ НА ТЕПЛООБМЕН И СОПРОТИВЛЕНИЕ В ПОТОКЕ СЖИМАЕМОГО ГАЗА Специальность 01.04.14 – Теплофизика и теоретическая теплотехника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва – 2010 2 Работа выполнена в НИИ механики МГУ. Научный руководитель : доктор технических наук, профессор, академик РАН Леонтьев Александр Иванович Официальные оппоненты : доктор...»

«ЩАПОВА Елена Владимировна ВСЕРОССИЙСКОЕ ХОРОВОЕ ОБЩЕСТВО В ИСТОРИИ ОТЕЧЕСТВЕННОЙ МУЗЫКАЛЬНОЙ КУЛЬТУРЫ XX СТОЛЕТИЯ ВТОРОЙ ПОЛОВИНЫ Специальность 17.00.02 – Музыкальное искусство АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата искусствоведения Ростов-на-Дону – 2013 2 Работа выполнена на кафедре хорового дирижирования Академии хорового искусства имени В.С. Попова Научный руководитель : доктор искусствоведения, профессор Ефимова Наталья Ильинична Официальные...»

«Чупрынова Мария Юрьевна ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ HELICOBACTER PYLORIАССОЦИИРОВАННОГО ГАСТРИТА У ПОДРОСТКОВ ПРИ ИНФИЦИРОВАНИИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА ВИРУСОМ ЭПШТЕЙНА-БАРР 14.01.08 – педиатрия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Красноярск – 2014 Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Омская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской...»

«БЕЛЯЕВА НИНА ЛЕОНИДОВНА ЭКОНОМИЧЕСКОЕ ВОСПИТАНИЕ ДЕТЕЙ СТАРШЕГО ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА 13.00.07 – теория и методика дошкольного образования АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Челябинск – 2008 Работа выполнена в ГОУ ВПО Елабужский государственный педагогический университет Научный руководитель : доктор педагогических наук, профессор Богомолова Мария Ивановна Официальные оппоненты : доктор педагогических наук, профессор Аменд...»

«ДЖАДЖАНИДЗЕ ИГОРЬ МАМИЕВИЧ МОТОРНО-ЭВАКУАТОРНАЯ ДИСФУНКЦИЯ ЖЕЛУДОЧНОКИШЕЧНОГО ТРАКТА ПРИ ОСТРОМ ДЕСТРУКТИВНОМ ПАНКРЕАТИТЕ 14.01.17. – хирургия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Красноярск – 2013 Работа выполнена на кафедре хирургии ГБОУ ДПО Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования Министерства здравоохранения Российской Федерации, на базе НУЗ Дорожная клиническая больница на ст....»

«УДК: 808. 2 Гагарина Наталья Владимировна СТАНОВЛЕНИЕ ГРАММАТИЧЕСКИХ КАТЕГОРИЙ РУССКОГО ГЛАГОЛА В ДЕТСКОЙ РЕЧИ Специальность 10.02.01 – русский язык АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора филологических наук Санкт-Петербург 2009 Диссертация выполнена на кафедре русского языка государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования государственный педагогический университет им. Российский А.И. Герцена Научный консультант : доктор...»

«Луконина Оксана Игоревна МАКСИМИЛИАН ШТЕЙНБЕРГ: ЛИЧНОСТЬ И ТВОРЧЕСТВО В КОНТЕКСТЕ ОТЕЧЕСТВЕННОЙ КУЛЬТУРЫ ПЕРВОЙ ПОЛОВИНЫ ХХ ВЕКА Специальность 17.00.02 – Музыкальное искусство Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора искусствоведения Ростов-на-Дону – 2013 Работа выполнена в Ростовской государственной консерватории (академии) им. С. В. Рахманинова Научный консультант : доктор искусствоведения, профессор Казанцева Людмила Павловна Официальные оппоненты :...»

«ЧЕПУРНАЯ Анна Александровна ПРОСТРАНСТВЕННО-ВРЕМЕННОЙ АНАЛИЗ ДИНАМИКИ РАСТИТЕЛЬНОСТИ В ПРЕДЕЛАХ ЛЕСНОЙ ЗОНЫ ВОСТОЧНОЕВРОПЕЙСКОЙ РАВНИНЫ В МИКУЛИНСКОЕ МЕЖЛЕДНИКОВЬЕ (ПО ПАЛИНОЛОГИЧЕСКИМ ДАННЫМ) 25.00.25 – Геоморфология и эволюционная география Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Москва, 2009 Работа выполнена в лаборатории Эволюционной географии Института географии РАН Научный руководитель : Доктор географических наук, профессор...»

«Ковальчук Лидия Петровна КОНЦЕПТУАЛЬНАЯ ИНТЕГРАЦИЯ ИСХОДНОГО ПРОСТРАНСТВА ЖЕНЩИНА В СКАЗОЧНОМ ДИСКУРСЕ (на материале русских и английских народных сказок) Специальность 10.02.20 – Сравнительно-историческое, типологическое и сопоставительное языкознание АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата филологических наук Челябинск – 2012 Работа выполнена на кафедре теории и практики английского языка ФГБОУ ВПО Челябинский государственный университет кандидат...»

«ГРИГОРЬЕВЫХ АНДРЕЙ ВИКТОРОВИЧ Специальность 05.13.01 - Системный анализ, управление и обработка информации (в нефтяной и газовой промышленности) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Ухта 2011 Работа выполнена в Ухтинском государственном техническом университете доктор физико-математических наук, профессор Научный руководитель Кобрунов Александр Иванович Официальные оппоненты доктор технических наук, Калинин Дмитрий Федорович...»

«ЧУДАКОВА Наиля Муллахметовна КОНЦЕПТУАЛЬНАЯ ОБЛАСТЬ НЕЖИВАЯ ПРИРОДА КАК ИСТОЧНИК МЕТАФОРИЧЕСКОЙ ЭКСПАНСИИ В ДИСКУРСЕ РОССИЙСКИХ СРЕДСТВ МАССОВОЙ ИНФОРМАЦИИ (2000 – 2004 гг.) 10. 02. 01. – русский язык АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата филологических наук Екатеринбург – 2005 Работа выполнена в ГОУ ВПО Уральский государственный педагогический университет Научный руководитель : Заслуженный деятель науки РФ, доктор филологических наук, профессор...»

«Капитова Олеся Викторовна Правовая природа механизма алиментирования в семейном праве Российской Федерации Специальность 12.00.03- гражданское право; предпринимательское право; семейное право; международное частное право Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата юридических наук Москва 2009г. Диссертация выполнена на кафедре гражданско-правовых дисциплин юридического факультета им. М.М. Сперанского ГОУ ВПО Академия народного хозяйства при Правительстве...»








 
2014 www.av.disus.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.