WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

имени М.В. ЛОМОНОСОВА

БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

На правах рукописи

КРИВУШИНА

Анастасия Александровна

МИКРОМИЦЕТЫ В АВИАЦИОННОМ ТОПЛИВЕ

Специальность 03.02.12 – микология

Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва – 2012

Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии Биологического факультета Московского государственного университета имени М. В. Ломоносова и в Федеральном государственном унитарном предприятии «Всероссийский научноисследовательский институт авиационных материалов» (ФГУП «ВИАМ»)

Научный руководитель кандидат биологических наук Чекунова Лидия Николаевна

Официальные оппоненты доктор биологических наук Феофилова Елена Петровна кандидат биологических наук Семёнова Татьяна Александровна

Ведущая организация Институт биохимии и физиологии микроорганизмов имени Г. К. Скрябина РАН, отдел "Всероссийская коллекция микроорганизмов" (ИБФМ РАН, ВКМ)

Защита диссертации состоится 13 апреля 2012 года в 15:30 на заседании диссертационного совета Д 501.001.46 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата биологических наук при Московском государственном университете имени М. В. Ломоносова по адресу: 119991, Москва, Ленинские горы, д.

1, стр. 12, МГУ имени М. В. Ломоносова, Биологический факультет (аудитория М-1) Тел./факс: (495) 939-39-

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ имени М. В. Ломоносова Автореферат разослан 12 марта 2012 года Учный секретарь диссертационного совета, М. А. Гусаковская кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования Изучение микроскопических грибов, растущих в авиационном топливе, является крайне актуальной темой, поскольку они могут быть причиной сбоев в работе авиационной техники, и постоянный контроль их необходим для обеспечения надежности авиаперевозок (Gaylarde et al., 1999; Hamme et al., 2003; Bento et al., 2005; Семенов и др., 2008 и др.). Особую значимость данная проблема приобрела в последние годы, в связи с увеличением поставок российской техники в страны с влажным тропическим и субтропическим климатом (Емельянов, 2008), где в условиях повышенной температуры и влажности наиболее велик риск возникновения биоповреждений авиационного топлива (Кондратюк и др., 2007).

Кроме того, исследование микромицетов, растущих в авиационном топливе, важно для понимания изменения метаболических процессов микроорганизмов при адаптации к новым субстратам и к постоянно меняющимся условиям.

Многочисленными исследованиями установлено, что в топливных баках самолетов могут присутствовать различные виды микроорганизмов, однако наибольшую опасность представляют мицелиальные грибы (Кондратюк и др., 2007).

В результате развития микромицетов происходит засорение топливных систем (баков, фильтров, насосов) мицелиальной биомассой, следствием чего может быть выход из строя двигателей. Случаи засорения топливных фильтров неоднократно происходили при выполнении полетов таких типов самолетов, как Ил-76, Ту-154, ТуМ-17 и др. (Семенов и др., 2008). Образование агрессивных продуктов жизнедеятельности микромицетов, кислот и ферментов, ведет к усилению коррозии металлов, разрушению неметаллических материалов и к нарушению герметичности баков, что также может стать причиной аварии (Martel, 1987; Коваль, Сидоренко, 1989; Ferrari et al., 1998; Van Hamme et al., 2003; Rauch et al., 2006 и др.).

В результате процесса адаптации к новым субстратам в топливе могут появляться виды грибов, ранее здесь не отмеченные. Некоторые применяемые средства борьбы с биоповреждениями топлив могут оказаться не эффективными по отношению к новым видам. Поэтому очень важно постоянное и всестороннее процессов их жизнедеятельности.

Цели и задачи исследования. Цель работы – изучение видового состава и физиологических особенностей мицелиальных грибов, способных развиваться в авиационном топливе. Для е достижения были поставлены следующие задачи:

выделить микромицеты из образцов топлива, взятого в баках самолетов, из топливохранилищ и после экспозиции на экспериментальных площадках;

определить видовой состав выделенных грибов;

изучить их способность расти в топливе, выявить среди них наиболее активных деструкторов;

углеводородах нефти, входящих в состав топлив;

изучить влияние температуры на рост и жизнеспособность микромицетов в топливе;

изучить морфологические особенности наиболее активных деструкторов топлива при росте в авиационном топливе и на питательных средах;

оценить способность различных модификаций отечественной биоцидной присадки к топливу подавлять рост выделенных микромицетов и выбрать наиболее эффективную.

Научная новизна. Результаты исследования имеют большое значение для совершенствования методов контроля и обеспечения безопасности полетов.

Полученные данные о видовом разнообразии микромицетов, обитающих в такой специфической среде как авиационное топливо, имеют также важное теоретическое значение для дальнейших исследований микроорганизмов, способных развиваться за счет нефтепродуктов. Впервые совместно были изучены микромицеты, обитающие в топливных баках самолетов, в топливохранилищах, а также грибы из природных местообитаний, способные поражать топливо. В результате исследований выявлено 32 вида мицелиальных грибов, относящихся к 13 родам, морфологических типов мицелия без спороношений. Однако также показано, что большинство выделенных видов не причастны к процессам деструкции. Впервые было предложено разделять выделенные из топлива микромицеты на три группы по активности роста в топливе: (1) активные деструкторы, (2) потенциальные деструкторы и (3) частично адаптированные к среде и случайные виды.

Из авиационного топлива впервые выделен вид Monascus floridanus и показана его способность к росту в топливе и на различных углеводородах нефти.

Для него отмечены морфологические признаки, не описанные для типового штамма:

наличие ребровидной выпуклой полосы (ростковой щели) на одной из сторон аскоспор, образование наряду с известными конидиями типа Basipetospora второго phialophora-подобного спороношения.

которые активно развиваются в авиационном топливе за счет использования углеводородов. Культуры данных грибов будут использованы для проведения испытаний на грибостойкость различных видов топлива и материалов топливных дезинфицирующих средств и других способов защиты топливных систем самолетов от биоповреждений. Впервые выделенный штамм вида Monascus floridanus, активно растущий в топливе, передан во Всероссийскую коллекцию микроорганизмов при Институте Биохимии и Физиологии Микроорганизмов имени Г. К. Скрябина РАН (№ВКМ F-4444). Полученная в ходе проведения данной работы нуклеотидная последовательность исследуемого штамма была размещена в генбанке NCBI (№FR827895).

биоцидной присадки к топливу «БИКАИР» подавлять рост активных микромицетовдеструкторов. Выбраны наиболее эффективные модификации и их минимальные концентрации, которые могут быть использованы для защиты авиационного топлива от микробиологических повреждений.

Апробация работы. Результаты работы были доложены на международном конгрессе «XV Congress of European Mycologists» (Санкт-Петербург, Россия, 2007), 2м Съезде микологов России (Москва, 2008), на молодежной научно-технической конференции «Молодежь в авиационном материаловедении» (Москва, 2008), на межотраслевой научно-технической конференции «Композиционные материалы в авиакосмическом материаловедении» (Москва, 2009), на международной конференции, посвященной 180-летию со дня рождения выдающегося физиолога И.М. Сеченова, «IV International Young Scientists conference. «Biodiversity. Ecology.

Adaptation. Evolution» (Одесса, Украина, 2009), на Московской международной научно-практической конференции «Биотехнология: экология крупных городов»

(Москва, 2010), на VIII научной конференции по гидроавиации «ГидроавиасалонГеленджик, 2010), на международной молодежной конференции по международном конгрессе «XVI Congress of European Mycologists» (Халкидики, Греция, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 работ, в том числе статьи в журналах, рекомендуемых ВАК.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Работа изложена на 182 страницах, содержит 20 таблиц и 36 рисунков, а также приложения, содержащие 14 таблиц. Список литературы включает 120 источников, из них 56 на английском языке.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

биоповреждений нефтепродуктов, в том числе авиационного топлива, об особенностях микромицетов, способных развиваться в топливе, и об их видовом составе. Представлены литературные данные о влиянии внешних факторов на биоповреждения нефтепродуктов, рассмотрены механизмы расщепления углеводородов топлива микромицетами. Проведен анализ способов защиты авиационного топлива от биоповреждений.

Образцы авиационного топлива. Для выделения и изучения микромицетов были использованы образцы авиационного реактивного топлива ТС-1 различного происхождения. Все исследуемые образцы топлива ТС–1 были предоставлены Всероссийским Институтом Авиационных Материалов (ФГУП «ВИАМ»). К первой группе относились четыре образца топлива, извлеченные непосредственно из кессон-баков эксплуатирующихся самолетов, совершивших аварийные посадки по причине забивки фильтров. Образцы «Китай», «Краснодар» и «Ульяновск»

содержали топливо, воду из отстойной зоны баков и темноокрашенные слизистые сгустки на границе раздела фаз. Образец «Иран» содержал топливо, а позже небольшой мицелиальный сгусток, образовавшийся в емкости после нескольких месяцев хранения образца в лаборатории. Ко второй группе относились пять образцов топлива, выставленные на экспозицию в закрытых чашках Петри с добавлением минеральной среды на экспериментальных площадках в г. Батуми и г.

Сочи. Чашки ежемесячно открывали сроком на 1 час, топливо и минеральную среду добавляли по мере испарения. Образец «Батуми-1» находился на экспозиции месяцев, образец «Батуми-2» - 24 месяца. Образец «Сочи-1» находился на экспозиции 13 месяцев, образец «Сочи-2» - 15 месяцев, «Сочи-3» - 25 месяцев. За указанные периоды в чашках Петри образовались хлопьевидные образования и небольшие сгустки. К третьей группе относились 3 образца топлива ТС-1, не имеющие видимых признаков микробиологического поражения. Образец «Внуково»

получен из топливохранилища аэродрома Внуково, образец «МНПЗ» взят из хранилища Московского Нефтеперерабатывающего Завода, образец «Хабаровск» с Хабаровского Нефтеперерабатывающего Завода.

Выделение микромицетов и определение их видовой принадлежности.

Для выделения грибов использовали метод прямого посева и метод серийных разведений (Дудка и др., 1982) на среду Чапека и агаризованное сусло. Метод серийных разведений использовали для образцов с поражениями, т. е. содержащих слизистые сгустки, метод прямого посева использовали для всех типов образцов.

Определение грибов вели с помощью следующих определителей: Raper, Fennell, 1965; Raper et al., 1968; Ellis, 1971; Kendrick, 1973; Gams, Holubova – Jechova, 1976;

Билай, 1977; Booth, 1977; Domsch et al., 1980, 2007; Лугаускас и др., 1987; Watanabe, 1994; De Hoog et al., 2000; Gams, 2000 и др.

Изучение способности роста выделенных грибов в топливе. В пробирки с 3 мл стерильного топлива ТС-1 и 3 мл минеральной среды вносили по 0,3 мл споровой суспензии штамма гриба, пробирки встряхивали и помещали в термостат с температурой +28С. Контроль роста грибов осуществляли через каждые 5 суток в течение месяца. Признаки роста оценивали визуально, в баллах: 0 баллов – нет роста; 1 балл – мутный раствор, очень мелкие хлопья; 2 балла – хлопья средней величины, легко различимы визуально; 3 балла – крупные хлопья; 4 балла – небольшие сгустки; 5 баллов – крупные сгустки. В случае образования крупных мицелиальных сгустков их фильтровали через бумажные фильтры, высушивали в сушильном шкафу и взвешивали.

углеводородах нефти. В эксперименте использовали предельные углеводороды с длиной углеродной цепи от 6 до 17-ти: гексан (С6Н14), гептан (С7Н16), октан (С8Н18), декан (С10С22), додекан (С12Н26), гексадекан (С16Н34), гептодекан (С17Н36). Опыт проводили на шести активных штаммах микромицетов разных видов: Hormoconis resinae №Ul-1, Monascus floridanus №K-1, Alternaria alternata №Bat-30, Aspergillus ustus №K-92, Fusarium solani №Bat-15, Geotrichum candidum №Kr-2. Методика эксперимента та же, что и в предыдущем пункте, но вместо топлива ТС-1 в пробирки добавляли соответствующий углеводород.

микромицетов в топливе. Готовили пробирки с топливом и суспензией спор, как описано ранее. За признаками роста наблюдали визуально, по окончании эксперимента проводили высев инокулята из пробирок на питательные среды. Для изучения влияния температуры на рост активных и потенциальных деструкторов топлива были использованы 10 наиболее активных штаммов микромицетов. Пробирки помещали в холодильники и термостаты с температурами:

-20 С, +9 С, +18 С,+ 28 С, +36 С сроком на 21 сутки. Для изучения влияния экстремальных температур на рост и жизнеспособность Hormoconis resinae и Monascus floridanus вместо топлива использовали жидкое сусло в целях пожарной безопасности. Пробирки помещали в термостаты с температурами +40 С, +45 С, +50 С, +55 С, +60 С и +70 С и в холодильник с температурой -57С сроком на 1, 3 и 7 суток. После все пробирки помещали в термостат с температурой +28 С и проверяли на наличие роста грибов через каждые 3-4 дня в течение двух недель.

Для изучения влияния перепадов температуры на рост и жизнеспособность H. resinae и M. floridanus пробирки с топливом, минеральной средой и суспензией помещали в холодильную камеру с температурой -60С на 3 часа, после чего переносили в термостат с температурой +60С также сроком на 3 часа, далее помещали в термостаты и холодильники со следующими температурами: +5С, +15С, +25С, +35С, +45С сроком на 8 недель.

Изучение особенностей штаммов Hormoconis resinae. Для изучения морфологических особенностей использовали питательные среды Чапека, агаризованное сусло и топливо ТС-1, штаммы выращивали при +25С. При приготовлении препаратов для сканирующей микроскопии фрагменты среды с мицелием фиксировали 1 час в глутаральдегиде (2,5%), далее промывали три раза в фосфатном буфере по 15 минут, обезвоживали с помощью спиртов (30%, 50%, 70%, 80%, 96%), помещали в ацетон. Образцы высушивали при критической точке, наклеивали на столики, напыляли платино-палладиевой смесью (ионный распылитель Goko IB-3) и наблюдали на сканирующих электронных микроскопах CamScan S2 и Jeol JSM-6380. Для изучения способности роста в топливе штаммов H. resinae из разных мест обитания были использованы 5 штаммов H.

resinae, выделенных нами из исследуемых образцов, и 7 штаммов H. resinae из других коллекций, выделенные с различных субстратов и из разных географических зон: штаммы №№F-1700, F-1701, F-1962 и F-1963 предоставлены Всероссийской Коллекцией Микроорганизмов, штаммы №№76,79 и 801 Ждановой Н. Н. (Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного, Киев, Украина).

Изучение особенностей штамма Monascus floridanus. Генетическую идентификацию штамма проводили на основе анализа нуклеотидной последовательности D1/D2 домена большой субъединицы (LSU) рДНК. ДНК выделяли из 6-ти суточной культуры с помощью стеклянной дроби (300-500 мкм), инкубации при 650C в течение 1 час в лизирующем буфере (Tris Base 50mM, NaCl 250mM, ЭДТА 50mM, SDS 0.3%, pH 8) и замораживания культуры. Амплификацию региона рДНК проводили с использованием праймеров ITS1f, NL4 и смеси для ПЦР ScreenMix (ЗАО «Евроген», Москва). Очистку и подготовку к анализу ПЦР-продукта проводили с использованием набора BigDye XTerminator Purification Kit («Applied Секвенирование фрагмента рДНК проводили с помощью набора реактивов BigDye XTerminator Purification Kit («Applied Biosystems», USA) с последующим анализом продукта реакции на секвенаторе Applied Biosystems 3130xl Genetic Analyzer в Научно-производственной компании «Синтол» (Москва). Для филогенетического анализа полученного результата использовали пакет программ MAFFT 6 и MEGA4.

Нуклеотидные последовательности для построения филогенетического дерева были использованы по данным из статьи (Park, Jong, 2003). Для изучения активности роста штамма M. floridanus были использованы следующие среды: среда Чапека с дрожжевым экстрактом и без него, агаризованное сусло с пептоном и глюкозой и без них, картофельно-декстрозный агар с молочной кислотой и без нее, среда Чапека-Докса без сахарозы, среда на основе овощного сока «8 овощей», азотноглицериновая среда. Культуры выращивали при +25С в течение 35 суток, диаметр колоний измеряли на 7-е и 35- сутки роста. Для изучения морфологических особенностей штамма M. floridanus выращивали культуру и готовили образцы также как и в случае с H. resinae.

Изучение эффективности модификаций биоцидной присадки к топливу «БИКАИР» проводили в соответствии с ГОСТ 9.023-91. В эксперименте были использованы 10 наиболее активных штаммов микромицетов. Были протестированы 18 модификаций отечественной биоцидной присадки к топливу «БИКАИР»

производства НПОАО «СинтезПав», которые отличались между собой содержанием катионных поверхностно активных веществ (КПАВ), относящихся к классу алкилимидазолинов, этилцеллозольва и ряда других компонентов. Присадки были испытаны в трех концентрациях 0,005%, 0,01% и 0,3%. Также была испытана отечественная присадка «ПВКЖ» на основе этилцеллозольва в концентрации 0,3%.

1. Микромицеты в топливных баках самолетов Из четырех образцов пораженного топлива, взятого в баках самолетов, было выделено 27 культур микромицетов, относящихся к 18 видам и 8 родам. Cреди них голоморфный вид аскомицетов (отдел Ascomycota): Monascus floridanus P. F.Cannon et E.L.Barnard. Остальные 17 видов относятся к анаморфам аскомицетов: Alternaria alternata (Fr.) Keissl., Aspergillus fumigatus Fresen., A. niger Tiegh., A. ustus (Bainier) Thom et Church, Botryotrichum piluliferum Sacc. et Marchal, Cladosporium bruhnei Linder, C. cladosporioides (Fresen.) G.A. de Vries, C. macrocarpum Preuss, Geotrichum candidum Link, Hormoconis resinae (Lindau) Arx et G.A. de Vries, Penicillium adametzii K.M. Zalessky, P. aurantiogriseum Dierckx, P. brevicompactum Dierckx, P. corylophilum Dierckx, P. spinulosum Thom, P. tardum Thom, P. verrucosum Dierckx. Кроме того, выделено 5 морфологических типов мицелия без спороношений.

Во всех четырех образцах топлива из баков самолетов присутствовал гриб Hormoconis resinae. В образце «Краснодар» H. resinae значительно преобладал по численности, в образце «Ульяновск» он оказался единственным выделенным видом.

Образец «Иран» изначально представлял собой только слой топлива без видимых загрязнений. Но после нескольких месяцев хранения образца на дне емкости образовался небольшой мицелиальный сгусток диаметром несколько миллиметров, который при рассеве оказался видом H. resinae. Однако в четвертом образце «Китай», помимо H. resinae, доминировал ещ один вид - Monascus floridanus. Если о способности H. resinae усваивать углеводороды авиационного топлива известно уже давно, то литературных данных о росте в топливе вида M. floridanus найдено не было. Выделение большинства остальных видов грибов в данных образцах носило единичный характер.

Для определения способности выделенных микромицетов к росту в топливе, мы проводили повторную инокуляцию стерильного топлива выделенными грибами. По результатам эксперимента исследуемые 27 штаммов были разделены на три группы: (1) активные деструкторы (5 баллов), (2) потенциальные деструкторы (4 балла), (3) частично адаптированные к среде и случайные микромицеты (3 и менее баллов). К первой группе были отнесены выделенные из разных образцов штамма Hormoconis resinae (№№ К-68, Kr-42, Ul-1, Ir-12) и штамм Monascus floridanus №К-1 (образец «Китай»). Как и ожидалось, они показали наиболее активный рост при повторной инокуляции стерильного топлива. Ко второй группе были отнесены два штамма Aspergillus ustus №К-92 (образец «Китай») и Geotrichum candidum №Kr- (образец «Краснодар»). Потенциальные деструкторы, или микромицеты второй группы, несомненно, представляют интерес для дальнейшего изучения. Возможно, при наличии определенных условий, например, при отсутствии в среде таких конкурентов как H. resinae, данные грибы могут проявить себя как активные деструкторы топлива. Большинство штаммов грибов, выделенных из топливных баков самолетов, были отнесены к третьей группе, которая объединяет слабо растущие и не растущие в топливе грибы.

2. Микромицеты в топливе на экспериментальных площадках Данное исследование проводилось с целью выявления микромицетов, обитающих в естественных условиях на природных субстратах, которые смогут начать свое развитие при попадании в авиационное топливо.

Из пяти образцов топлива, находящихся на экспозиции на экспериментальных площадках, была выделена 21 культура микромицетов, относящихся к 12 видам и родам анаморфных аскомицетов: Alternaria alternata (Fr.) Keissl., Aspergillus niger Tiegh., A. sydowii (Bainier et Sartory) Thom et Church, A. ustus (Bainier) Thom et Church, Fusarium solani (Mart.) Sacc., Hormoconis resinae (Lindau) Arx et G.A. de Vries, Neoscytalidium dimidiatum (Penz.) Crous et Slippers, Penicillium corylophilum Dierckx, P.

funiculosum Thom, P. miczinskii K.M. Zalessky, P. tardum Thom, Phialophora europaea de Hoog, Mayser et Haase. Также выделено 5 морфологических типов мицелия без спороношений.

В двух образцах «Батуми» количественно доминировал вид Homoconis resinae.

В образце «Сочи-1» чаще других встречены виды Aspergillus niger и Fusarium solani.

Выделение микромицетов в образцах «Сочи-2» и «Сочи-3» носило единичный характер.

Наиболее активный рост при вторичной инокуляции топлива показали штаммы вида Hormoconis resinae (№Ваt-1, Ваt-29), выделенные из образцов топлива «Батуми» и соответственно отнесенные к группе активных деструкторов. Ко второй группе были отнесены штамм Alternaria alternatа №Ваt-3, встреченный в одном образце «Батуми-2», и 2 штамма Fusarium solani №Ваt-15 и №А-8, встреченные в образцах «Батуми-1» и «Сочи-1» соответственно. Остальные штаммы грибов, выделенные из топлива после экспозиции на экспериментальных площадках, были адаптированных и случайных) микромицетов.

3. Микромицеты в топливохранилищах Микромицеты, способные развиваться в баках самолетов, попадают туда на разных стадиях эксплуатации топлива: при транспортировке, хранении, заправке самолетов. Особую опасность представляет развитие грибов в топливе при нарушениях правил хранения, например, при нарушении герметичности резервуаров и попадания в них влаги. В этом случае топливо, содержащее в себе микромицетыдеструкторы, может быть использовано неоднократно для заправки техники и стать причиной целого ряда аварийных ситуаций. Данное исследование проводили с целью выявления микромицетов в топливе, находящемся на хранении в специальных резервуарах в отдельно взятых топливохранилищах, а также изучения их способности роста в топливе.

Из трех образцов топлива, взятых в топливохранилищах, было выделено культур микромицетов, относящихся к 12 видам и 5 родам. Все 12 видов относятся к анаморфам аскомицетов: Aspergillus сhevalieri Thom et Church, A. fumigatus Fresen., A. niger Tiegh., A. pulvinus Kwon-Chung et Fennell, Chromelosporium fulvum (Link) McGinty, Cladosporium oxysporum Berk. et M. A.Curtis, Hennebert et Korf, Penicillium aurantiogriseum Dierckx, P. chrysogenum Thom, P. citrinum Thom, P. funiculosum Thom, P. lanosum Westling, Phoma eupyrena Sacc. Кроме того, выделено 2 морфологических типа мицелия без спороношений.

Среди трех исследованных образцов топлива наибольшее содержание пропагул грибов отмечено в топливе, взятом из хранилища Хабаровского нефтеперерабатывающего завода – 19,7 КОЕ/мл. В образце топлива, взятом из хранилища Московского нефтеперерабатывающего завода, это значение составило 7,5 КОЕ/мл, из образца топлива, взятом в хранилище аэродрома Внуково – 4, КОЕ/мл.

Ни один из штаммов, выделенных из топливохранилищ, не проявил активности при искусственной инокуляции топлива. Все грибы, выделенные из образцов топлива в хранилищах, были отнесены к группе частично адаптированных и случайных микромицетов. Таким образом, на момент исследования топливо из данных хранилищ не содержало в себе потенциальных микромицетов-деструкторов, и угрозы возникновения биоповреждения в резервуарах с топливом не было.

Слабые показатели роста в топливе в данном случае свидетельствуют об отсутствии таковой способности в настоящее время, но и не исключают ее появление в будущем. Поэтому необходим строгий контроль условий хранения и состояния резервуаров, в которых хранится топливо.

По результатам предыдущих исследований способности роста в топливе микромицетов из разных образцов были выявлены причастные к процессам деструкции и случайные штаммы (схема).

Распределение изученных 63 штаммов грибов по способности их роста в топливе Bat-1,Bat-29,Кr-42,Ul-1,Ir- Частично адаптированные и случайные микромицеты:

Alternaria alternatа Aspegillus chevalieri №Hb-2 Кr-6, Ir-1, Ir-7, Ir-11,А-2, В- P. funiculosum A. fumigatus №№Кr-57,Hb-12 6, Sc-8, Sc-10, M-11,M-12 №№Sc-1,M- Botryotrichum piluliferum №Ir-9 P. aurantiogriseum Bat-2,Bat- Chromelosporium fulvum №M-5 №№К-37, Кr-1, M-1 P. verrucosum №К- Cladosporium bruhnei №Ir-5 P. brevicompactum №К-85 Phialophora europaea C. cladosporioides №Ir-2 P. chrysogenum №Vn-2 №Sc- Далее была проведена оценка активности роста в топливе активных и потенциальных деструкторов по значению накопления биомассы после месяца выращивания. Наибольший вес мицелия отмечен для всех штаммов H. resinae (№№К-68, Bat-1, Bat-29, Кr-42, Ul-1, Ir-12) и штамма M. floridanus №К-1. Самое большое значение биомассы отмечено для штамма H. resinae №Ul-1, выделенного из бака самолета, оно составило 0,4084 грамм/100 мл. Среди пяти штаммов второй группы наибольшее значение биомассы отмечено для штамма A. ustus №К-92 – 0, грамм/100 мл, наименьшее для G. candidum №Kr-2 – 0,05 грамм/100 мл. Разница в весе мицелия между двумя штаммами F. solani №А-8 и №Ваt-15, выделенными с несущественной – 0,017 грамм/100 мл (при стандартном отклонении ±0,01).

Рис. 1. Биомасса активных деструкторов после месяца роста на углеводородах (± стандартное отклонение, n=5).

Рис. 2. Биомасса потенциальных деструкторов после месяца роста на углеводородах (± стандартное отклонение, n=5).

Известно, что авиационное топливо, или авиакеросин, на 20-60% состоит из предельных углеводородов. В состав авиационного бензина входят алканы с длиной углеродной цепи преимущественно С6-С10, в состав различных дизельных топлив – С10-С18. Топливо ТС-1 состоит на 50% из углеводородов парафинового ряда, на 36,4% и 13,6% из ациклических и ароматических углеводородов соответственно (Дубовкин и др., 1985). Далее была изучена способность роста активных и входящих в состав топлив.

Показано, что микромицеты растут на всех испытанных жидких углеводородах, кроме гексана, что подтверждают и литературные данные (Walker, 1973; Teh, 1975).

Для H. resinae №Ul-1 и M. floridanus №К-1 отмечена тенденция к росту на углеводородах с более длинными углеродными цепочками (С10-С17), что также неоднократно отмечено в литературе (Walker et al., 1973; Siporin, Cooney, 1975; Teh, 1975; Лвкина, Ребрикова, 1976; Hamme et al., 2003). Наибольшее значение прироста биомассы у H. resinae №Ul-1 отмечено на гептадекане (С17Н36), M.

floridanus №К-1 на гексадекане (С16Н34) (рис. 1). Накопление биомассы при росте на данных углеводородах приближается к значению при росте в авиационном топливе.

Вс это говорит о том, что штаммы H. resinae №Ul-1 и M. floridanus №К-1 способны поражать и другие авиационные дизельные топлива, которые содержат в своей основе углеводороды с длиной углеродной цепи С10-С17.

приблизительно с той же активностью, что и в авиационном топливе. Исключение составляет штамм F. solani №Ваt-15, для которого отмечен наиболее активный рост на испытанных углеводородах среди микромицетов второй группы (рис. 2), особенно на углеводородах с более короткой углеродной цепью (С7-С10) в отличие от микромицетов из первой группы. Накопление биомассы данного штамма при росте на октане в 3 раза превышает это значение при росте в топливе. Такие штаммы как F. solani №Ваt-15 могут быть причиной биоповреждений различных бензинов, содержащих углеводороды с длиной цепи С7-С10.

5. Влияние температуры на рост и жизнеспособность микромицетов в наиболее благоприятной для роста всех исследуемых штаммов микромицетов была температура +28С, что также подтверждает литературные данные (Благник, Занова, 1965; Atlas, 1975). Наибольшую активность проявил штамм Monascus floridanus №К-1.

При +9С и при +36С признаки роста отмечены лишь у данного вида. Все пять штаммов Hormoconis resinae показали практически одинаковые результаты при всех испытанных температурах. Кроме того, двухнедельное нахождение в воднотопливной среде при температуре -20 С не повлияло на скорость прорастания спор при высеве на питательные среды у всех исследуемых микромицетов.

Было исследовано влияние экстремальных температур на рост и жизнеспособность Hormoconis resinae и Monascus floridanus. Показано, что нахождение исследуемых штаммов при температуре -57 С в течение 1, 3, 7 суток не повлияло на скорость прорастания спор при высеве на питательную среду. Верхней температурной границей для штамма H. resinae №Ul-1 оказалась температура + С. После нахождения при данной температуре в течение 1 и 3-х суток споры прорастали в новый мицелий, при выдерживании пробирок в течение 7 суток споры полностью погибали. Для штамма M. floridanus №К-1 верхняя температура граница составила +55С. Только после суточного выдерживания споры гриба прорастали в единичные колонии при высеве на питательную среду.

жизнеспособность H. resinae и M. floridanus. Процедура теплового шока проводилась для имитации резких перепадов температур при перелетах и кратковременных стоянках самолетов, а выдерживание пробирок в термостатах с разными температурами после теплового шока для имитации условий длительной стоянки самолетов в условиях различных климатических зон. После резких перепадов температур оба штамма остались жизнеспособными, но по-разному проявили себя при перенесении в термостаты с определенными температурами.

Однако удивительным оказалось то, что температурный шок почти никак не повлиял на активность обоих штаммов. Как и в предыдущих опытах наиболее благоприятной температурой оказалась +25С, а штамм M. floridanus №К-1 опережал H. resinae №Ul-1 по интенсивности роста в начале эксперимента. Проведенное исследование касается физиологических свойств только исследуемых двух штаммов: Hormoconis resinae (№Ul-1, «Ульяновск») и Monascus floridanus (№К-1, «Китай»). Однако на их примере можно увидеть, насколько высока жизнеспособность микромицетов, растущих в топливе, при экстремальных температурах и при их резких изменениях.

биоповреждениями топливных систем, такие как прогревание, эффективны только в сочетании с другими способами, например, с химическими методами.

6. «Керосиновый гриб» Hormoconis resinae Были исследованы морфологические особенности выделенных штаммов Hormoconis resinae (№№К-68, Bat-1, Кr-42, Ul-1, Ir-12) при росте на питательных средах и в авиационном топливе. Ни у одного штамма не была найдена половая стадия. Также было показано, что у штаммов H. resinae при развитии в топливе образуются точно такие же конидиальные структуры, как и при росте на питательных средах (рис. 3-4).

Рис. 3. Спороношения H. resinae: а,б,в – световой микроскоп.

Рис. 4. Спороношения H. resinae: а,б – сканирующий электронный микроскоп.

Была исследована способность к росту в топливе штаммов H. resinae, выделенных нами из авиационного топлива и выделенных ранее другими исследователями из природных местообитаний, авиационного топлива и зоны аварии Чернобыльской АЭС. Среди испытанных штаммов оказались штаммы как способные к развитию за счет углеводородов авиационного топлива, так и не обладающие этой способностью. Штаммы H. resinae, выделенные из образцов авиационного топлива, развивались гораздо более активно по сравнению со штаммами, выделенными из природных мест обитания: с древесины, из воздуха и почвы. Штаммы H.resinae, выделенные из 4-го блока Чернобыльской АЭС, не проявили способности развиваться за счет углеводородов авиационного топлива.

7. Новый «керосиновый гриб» Monascus floridanus После выделения гриба из образца топлива в культуре присутствовало только конидиальное спороношение. Спустя 2,5 года в культуре изучаемого штамма стали образовываться плодовые тела – клейстотеции. По строению клейстотециев и аскоспор гриб был отнесен к роду Monascus Tiegh. Однако по совокупности признаков изучаемый штамм точно не подходил под описания известных видов рода Monascus. Генетическая идентификация штамма на основе анализа нуклеотидной последовательности D1/D2 домена большой субъединицы (LSU) рДНК показала, что выделенный штамм относится к виду Monascus floridanus. Были исследованы его морфологические особенности при росте на различных питательных средах и в топливе. Наиболее активный рост отмечен на агаризованном сусле, самый слабый рост – на среде Чапека – Докса без сахарозы. На всех остальных средах рост был приблизительно одинаковый. Было проведено сравнение полученных нами данных о росте на средах изучаемого штамма M. floridanus №К-1 с данными штаммов M.

floridanus: №078-4428, 078-3607, 078-2409, выделенных авторами при описании вида (Barnard, Cannon, 1987). Было показано, что общее предпочтение питательных сред у штаммов, выделенных авторами данного вида, совпадает с таковым у изучаемого нами штамма M. floridanus №К-1 несмотря на приспособление последнего к такой специфической среде как авиационное топливо.

При росте на стандартных питательных средах и в топливе у штамма M. floridanus №К-1 активно образуются плодовые тела – клейстотеции (рис. 5).

Описание половой стадии совпадает с таковым у типового штамма M. floridanus (Barnard, Cannon, 1987). Новой интересной особенностью является наличие ребровидной выпуклой полосы на аскоспорах, проходящей по одной из брюшных сторон аскоспор от полюса до полюса высотой примерно 0,4 мкм, скорее всего представляющей собой ростковую щель (рис. 6). Вторая брюшная сторона аскоспоры полностью гладкая. Данная особенность отсутствует в описании типового штамма. Наличие, количество и форма ростковых щелей и пор на аскоспорах служат определительными признаками в группах аскомицетов (Von Arx, 1975).

Рис. 5. Клейстотеции M. floridanus №К-1: а – световой микроскоп; б – сканирующий электронный микроскоп.

Рис. 6. Аскоспоры M. floridanus №К-1: а,б – сканирующий электронный микроскоп При росте на питательных средах и в авиационном топливе у штамма M. floridanus №К-1 образуется конидиальное спороношение по типу Basipetospora, характерное для видов рода Monascus (Barnard, Cannon, 1987, Park, Jong, 1987).

Конидии развиваются в базипетальных цепочках, первая конидия образуется как вздутие конца конидиогенной клетки с последующим отделением перегородкой.

Вторая и последующие конидии также образуются из небольшого вздутия под перегородкой предыдущей конидии. В первых работах полагалось, что при этом не происходит никаких ростовых процессов, и конидии образуются путем трансформации существующих клеток (Hughes, 1953). В 1968 году Cole и Kendrick показали, что при формировании конидий происходит рост конидиогенного локуса, который прекращается перед образованием перегородки, которая отделяет новую конидию (Cole, Kendrick, 1968). По разным источникам конидии Basipetospora трактовали как артроконидии (Barnett, Hunter, 1972; Кириленко, 1978; De Hoog et al., 2000), меристемартроконидии (Carmichael et al., 1980) или алевриоконидии (Pitt, бластоконидиям, развивающимся по ретрогрессивному пути (Seifert et al., 2011) (рис. 7).

Рис. 7. Спороношение M. floridanus №К-1 по типу Basipetospora: а – световой микроскоп; б – сканирующий электронный микроскоп.

Помимо спороношений по типу Basipetospora, был обнаружен второй тип спороношений, который при наличии очень похожих конидий отличается от предыдущего по способу конидиогенеза. Конидии образуются в специализированных клетках - фиалидах, которые оканчиваются характерным воротничком (рис. 8-9).

Данный тип спороношений встречается у видов рода Phialophora, поэтому его часто называют phialophora-подобным типом спороношений (Gams, 2000). Кроме того, схожие конидиогенные клетки встречаются у представителей рода Cadophora и других видов грибов, относящихся как минимум к трем порядкам аскомицетов (Harrington, Mcnew, 2003).

Рис. 8. Спороношение M. floridanus №К-1 по типу Phialophora: а,б,в – световой микроскоп.

Фиалиды у M. floridanus образуются на вершинах или ответвлениях вегетативных гиф, сидят одиночно или в пучках. Форма и размер фиалид варьирует.

Чаще всего встречаются вытянутые цилиндрические фиалиды (рис. 8а,в), 10-18 мкм длиной, 1-2,5 мкм шириной, реже более короткие бутылковидные (рис. 8б), т. е.

которые слегка сужаются к месту образования конидий, 5,5-10 мкм длиной, 1-3 мкм воронковидный воротничок, 0,75-1х2-3,5 мкм.

Рис. 9. Спороношение M. floridanus №К-1 по типу Phialophora: а,б – сканирующий электронный микроскоп.

Конидии, образующиеся в фиалидах, по внешнему виду схожи с конидиями, образующимися по типу Basipetospora. Они округлые, с усеченным основанием, шероховатые в разной степени, 3,5-4,5 мкм в диаметре, образуются в длинных базипетальных цепочках, которые легко распадаются. Первая образующаяся конидия, как правило, более или менее гладкая, более усеченная, последующие шероховатые, причем шероховатость конидий увеличивается по мере увеличения цепочки (рис. 9б). Phialophora-подобное спороношение впервые отмечено нами для видов рода Monascus.

Микроорганизмов имени Г.К. Скрябина РАН (№ВКМ F-4444). Полученная в ходе проведения данной работы нуклеотидная последовательность исследуемого штамма была размещена в генбанке NCBI (№FR827895).

8. Защита авиационного топлива от биоповреждений микромицетами Существуют физические, механические и химические методы борьбы с биоповреждениями топливных систем. Наиболее эффективные методы – это химические, т. е. введение в топливо специальных биоцидных присадок (Аббасова и др., 1991). Во ФГУП «ВИАМ» совместно с НПОАО «СинтезПав» около 10 лет назад началась разработка биоцидной присадки к топливу «БИКАИР» на основе алкилимидазолинов, относящихся к четвертичным аммонийным соединениям (ЧАС).

ЧАС широко используются в качестве биоцидных добавок, их преимущества заключаются в том, что они хорошо растворимы в воде, не имеют запаха и даже в небольшом количестве (0,05-0,1%) проявляют сильное биоцидное действие (Вербина, 1971; Андреюк и др.,1980).

Рис. 10. Результаты испытаний топливо с добавлением 0,3% присадки контроль без присадки (слева); 1 – недостаточным для подавления роста топливный слой, 2 – мицелий гриба, наиболее активных деструкторов.

3 – водно-минеральный слой.

Часть исследованных модификаций присадки «БИКАИР» подавляли рост всех изученных штаммов в концентрации 0,01-0,3%, но наиболее эффективными оказались 6 модификаций Т-55 Т-60, которые полностью подавляли рост микромицетов при минимальной концентрации 0,005% (рис. 10). Они будут биоповреждений микромицетами.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние несколько десятилетий в нашей стране не уделялось должного внимания проблеме биоповреждений авиационного топлива. В своей работе мы попытались показать, насколько эта проблема актуальна и в настоящее время, учитывая современные темпы расширения авиационных перевозок.

Как и в предыдущие годы, так и сейчас, основная роль в деструкции авиационного топлива принадлежит виду Hormoconis (Cladosporium) resinae, что было установлено в данной работе. Мы также показали, что впервые выделенный нами из топлива вид Monascus floridanus способен использовать углеводороды нефти наравне с H. resinae, а по некоторым показателям, таким как короткая лагфаза при прорастании в топливе и скорость образования биомассы на ранних этапах, даже превосходит известный «керосиновый» гриб. Кроме того, выделенные нами потенциальные деструкторы также представляют большой интерес для изучения, так как они могут проявить себя как активные деструкторы при наличии определенных условий. Полученные культуры грибов будут использованы при проведении испытаний на грибостойкость топлив с биоцидными присадками и материалов, применяемых в топливных системах.

Ещ один важный вопрос, затронутый в работе, это защита авиационного топлива от биоповреждений микроорганизмами. Как в нашей стране, так и за рубежом ведутся работы по разработке и исследованию новых биоцидных присадок к авиационному топливу. Однако, как показала наша работа, с появлением в топливе новых активных штаммов микромицетов, многие существующие способы борьбы могут оказаться неэффективными. Наряду с процессами синтеза новых экологически безопасных защитных препаратов, должны вестись работы по изучению их эксплуатирующейся техники.

Постоянное изучение микроорганизмов, растущих в авиационном топливе, и своевременный контроль состояния авиационной техники позволит избежать проблем, связанных с биоповреждениями авиационного топлива и материалов топливных систем, т.е. совместная работа технологов, химиков, инженеров и микробиологов сможет обеспечить безопасную эксплуатацию авиационной техники.

ВЫВОДЫ

1. Из всех исследованных образцов авиационного топлива выделено 32 вида мицелиальных грибов, относящихся к 13 родам, и 11 морфологических типов мицелия без спороношений. Cреди идентифицированных 1 голоморфный вид аскомицетов (отдел Ascomycota): Monascus floridanus P. F. Cannon et E. L. Barnard, остальные виды относятся к анаморфам аскомицетов.

2. По способности к росту в топливе все штаммы были разделены на 3 группы:

(1) активные деструкторы топлива, (2) потенциальные деструкторы топлива, (3) частично адаптированные к среде и случайные микромицеты. К группе 1 отнесены Hormoconis resinae и M. floridanus. Штаммы H. resinae встречены во всех образцах из баков самолетов и в двух образцах топлива с экспериментальных площадок. Штамм M. floridanus выделен из одного бака самолета. К группе 2 отнесены штаммы Aspergillus ustus и Geotrichum candidum - из бака самолета, Alternaria alternatа и Fusarium solani - из топлива с экспериментальных площадок. К группе 3 отнесены все остальные исследованные штаммы микромицетов.

3. Из авиационного топлива впервые выделен голоморфный аскомицет Monascus floridanus и показана его способность к росту в топливе и на различных углеводородах. Для штамма из топлива отмечен ряд характерных признаков, не отмеченных у типового штамма.

4. При росте на углеводородах наибольшее значение прироста биомассы у H. resinae отмечено на гептадекане, у M. floridanus на гексадекане, т. е. на углеводородах с более длинной углеродной цепью (С16-С17). Потенциальные деструкторы развивались на предельных углеводородах приблизительно с той же активностью, что и в авиационном топливе, наиболее активный рост отмечен для штамма F. solani на углеводородах с более короткой углеродной цепью (C7-C10).

5. Показано, что наиболее благоприятная температура для развития грибов в топливе составляет около +28С. Установлено, что штамм H. resinae сохраняет жизнеспособность при +60 С до трех суток, штамм M. floridanus сохраняет жизнеспособность при +55С не более суток. Активность роста в топливе обоих штаммов не изменяется при кратковременных колебаниях температуры от -60 С до +60 С.

6. Показано, что штаммы H. resinae, выделенные из образцов авиационного топлива, развивались гораздо более активно по сравнению со штаммами этого же вида, выделенными из почвы, воздуха, с древесины и из помещения 4-го блока Чернобыльской АЭС.

7. Установлено, что наиболее эффективными модификациями отечественной биоцидной присадки к топливу «БИКАИР» являются Т-55 – Т-60, которые полностью подавляют рост в топливе всех изученных микромицетов при минимальной концентрации 0,005 %.

8. Полученные культуры грибов будут использованы при проведении испытаний на грибостойкость топлив с биоцидными присадками и материалов, применяемых в топливных системах.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Васильева А. А., Чекунова Л. Н., Полякова А. В. Влияние температуры на рост и жизнеспособность Hormoconis resinae и Phialophora sp., развивающихся в авиационном топливе // Микология и фитопатология. Том 43, вып. 4, 2009. – с.

312-316.

2. Полякова А. В., Васильева А. А., Горяшник Ю. С., Линник М. А. Биозащита авиационных материалов // Российский Химический Журнал. Том LIV, М.: НУ «Редакция Российского химического журнала» и ООО «Российское химическое общество им. Д. И. Менделеева», 2010. – с. 117-120.

3. Каблов Е. Н., Полякова А. В., Васильева А. А., Горяшник Ю. С., Кириллов В. Н.

Микробиологические испытания авиационных материалов // Авиационная промышленность. Вып.1, М.: ОАО «Национальный институт авиационных технологий», 2011. – с. 35-40.

4. Vasilyeva A. A., Chekunova L. N., Bilanenko E. N., Kachalkin A. V., Polyakova A. V.

Characterization of the Strain Monascus floridanus P. F. Cannon & E. L. Barnard, Isolated from Aviation Fuel // Microbiology, vol. 81, n. 2, 2012 – p. 244-250.

5. Vasilyeva A. A., Chekunova L. N., Mokeeva V. L., Polyakova A.V. Micromycetes of aviation fuel // XV Congress of European Mycologists. Abstracts. – St. Petersburg:

TREEART LLC, 2007. – p. 106.

6. Васильева А. А., Полякова А. В. Микромицеты авиационного топлива // Молодежь в авиационном материаловедении: Тезисы докладов молодежной науч.-техн. конф. – М.: ВИАМ, 2008. – с. 31-32.

7. Васильева А. А., Чекунова Л. Н. Рост микромицетов на авиационном топливе и различных углеводородах // Современная микология в России. Том 2. материалы 2-го Съезда микологов России. М: Национальная академия микологии, 2008. – с.

8. Полякова А. В., Васильева А. А., Горяшник Ю. С., Кириллов В. Н. Испытания на микробиологическую стойкость в условиях теплого и влажного климата // Социально-экономическое и инновационное развитие Юга России. Материалы конференции. – Сочи: РИО СНИЦ РАН, 2009. – с. 172-176.

9. Васильева А. А., Полякова А. В. Биоповреждения авиационного топлива плесневыми грибами // Тезисы докладов межотраслевой научно-технической материаловедении», М.: ВИАМ, 2009. – с. 36-37.

10. Vasilyeva A. A., Chekunova L. N., Polyakova A.V. Filametous fungi, growing in aviation fuel // Biodiversity. Ecology. Adaptation. Evolution. Materials of IV International Young Scientists conference. – Odesa: Pechatniy dom, 2009. – p. 79-80.

11. Васильева А. А., Полякова А. В. Биоповреждения авиационного топлива микроскопическими грибами // Материалы Московской международной научнопрактической конференции, М.: ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д. И.

Менделеева, 2010. - с. 12. Vasilyeva A. A., Polyakova A.V. Microbiological corrosion of aviation fuel systems // http://www.dgm.de/past/2010/junior-euromat/.

Микробиологические повреждения авиационных материалов // Сборник докладов VIII научной конференции по гидроавиации «Гидроавиасалон-2010», часть II, М:

Издательский отдел Центрального Аэрогидродинамического Института имени проф. Н.Е.Жуковского (ЦАГИ), 2010. – с.215-216.

14. Vasilyeva A.A., Chekunova L.N., Polyakova A.V. Filamentius fungi in aviation fuel tanks and storages // XVI Congress of European Mycologists. Abstracts. – Vassilica, Thessaloniki, Greece: NAGREF-Forest Research Institute, 2011 – p. 272-273.

Благодарности. Я выражаю искреннюю благодарность моему научному всестороннюю поддержку при выполнении работы. Отдельное большое спасибо Елене Николаевне Биланенко и Алине Витальевне Александровой за помощь при определении грибов, ценные советы и рекомендации. Хочу поблагодарить Аллу Васильевну Полякову, Веру Леонидовну Мокееву, Ирину Ивановну Сидорову, Екатерину Благовещенскую за помощь при выполнении работ и ценные советы.

Спасибо Валентине Васильевне Круть за предоставленные модификации биоцидной присадки, Алексею Качалкину за молекулярный анализ, Нелли Николаевне Ждановой за предоставленные культуры грибов.

Я искренне признательна всему коллективу кафедры микологии и альгологии Биологического факультета МГУ и коллективу лаборатории 20 Всероссийского института авиационных материалов.



Похожие работы:

«ДУДНИКОВ Максим Васильевич ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ ЯРОВОЙ ТРИТИКАЛЕ ПО УСТОЙЧИВОСТИ К ПАТОГЕННОМУ КОМПЛЕКСУ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ФУЗАРИОЗА КОЛОСА В УСЛОВИЯХ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность: 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2012 1 Работа выполнена на кафедре генетики и биотехнологии ФГБОУ ВПО Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К.А. Тимирязева Научный руководитель : доктор...»

«Федорова Елена Петровна ТЕРМИНЫ РОДСТВА И СВОЙСТВА В ЯКУТСКОМ ЯЗЫКЕ (структурно-семантическое описание) Специальность 10.02.02. – Языки народов Российской Федерации (якутский язык) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата филологических наук Якутск - 2012 Работа выполнена в секторе лексикографии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт гуманитарных исследований и проблем малочисленных народов Севера Сибирского отделения...»

«ЕВСЕЕНКО КОНСТАНТИН АЛЕКСАНДРОВИЧ СОВЕРШЕНСТОВАНИЕ УСЛОВИЙ ВОСПРОИЗВОДСТВА ПРИРОДНЫХ РЕСУРСОВ Специальность: 08.00.01 (01) – Экономическая теория (Общая экономическая теория) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата экономических наук Научный руководитель д.и.н., профессор Сидоров А.В. Москва – 2011 Работа выполнена на кафедре экономической теории факультета государственного управления Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова Научный...»

«АВЕРИН ЕВГЕНИЙ ВИТАЛЬЕВИЧ РАЗРАБОТКА ПРОЦЕССА ЭЛЕКТРООСАЖДЕНИЯ СПЛАВА ОЛОВО-СУРЬМА ИЗ СЕРНОКИСЛОГО ЭЛЕКТРОЛИТА 05.17.03 – Технология электрохимических процессов и защита от коррозии АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва – 2010 Работа выполнена на кафедре технологии электрохимических процессов Российского химико-технологического университета им. Д.И. Менделеева. Научный руководитель : доктор химических наук, профессор Харламов...»

«НЕФЕДОВА СВЕТЛАНА АЛЕКСАНДРОВНА ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ АДАПТАЦИИ ЖИВОТНЫХ К АНТРОПОГЕННЫМ ВОЗДЕЙСТВИЯМ (НА ПРИМЕРЕ РЯЗАНСКОЙ ОБЛАСТИ) 03.02.08 – экология 0З.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Петрозаводск - 2012 2 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А. Костычева Научный консультант доктор сельскохозяйственных наук, профессор Иванов Евгений...»

«Ибрагимов Евгений Рашитович ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ СПИРАЛЬНОГО КОМПРЕССОРА СУХОГО СЖАТИЯ 05.04.06 - Вакуумная, компрессорная техника и пневмосистемы АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Казань – 2009 Работа выполнена в ЗАО НИИТурбокомпрессор им.В.Б.Шнеппа Научный руководитель : доктор технических наук, профессор Хисамеев Ибрагим Габдулхакович Официальные оппоненты : доктор технических наук, доцент Юша Владимир Леонидович кандидат...»

«СИРОТКИНА Ирина Владимировна РЕПРЕЗЕНТАЦИЯ ФРАЗЕОСЕМАНТИЧЕСКОГО ПОЛЯ ПЕЧАЛЬ В РУССКОМ И АНГЛИЙСКОМ ЯЗЫКАХ: СТРУКТУРНЫЙ И СЕМАНТИЧЕСКИЙ АСПЕКТЫ Специальность 10.02.20 – Сравнительно-историческое, типологическое и сопоставительное языкознание АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата филологических наук Челябинск – 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Тобольская...»

«Дьяков Алексей Сергеевич ПОВЫШЕНИЕ ДЕМПФИРУЮЩИХ СВОЙСТВ ПОДВЕСОК АТС ПУТЕМ ИЗМЕНЕНИЯ СТРУКТУРЫ И ХАРАКТЕРИСТИК РЕЗИНОКОРДНЫХ ПНЕВМАТИЧЕСКИХ РЕССОР 05.05.03 – Колёсные и гусеничные машины АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата технических наук Волгоград – 2009 2 Работа выполнена в Волгоградском государственном техническом университете Научный руководитель доктор технических наук, доцент Новиков Вячеслав Владимирович. Официальные оппоненты : доктор...»

«БУСКИН Николай Владиславович ИССЛЕДОВАНИЕ ГИПЕРБОЛИЧНОСТИ ГРУПП С ОДНИМ СООТНОШЕНИЕМ 01.01.06 математическая логика, алгебра и теория чисел АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени е кандидата физико-математических наук Новосибирск 2009 Работа выполнена в Новосибирском государственном университете Научный руководитель : доктор физико-математических наук, доцент Богопольский Олег Владимирович Официальные оппоненты : доктор физико-математических наук, доцент Бардаков...»

«Ванкович Александр Юрьевич Акмеологические знания в системе управления организационными отношениями Специальность 19.00.13 – психология развития, акмеология (психологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата психологических наук Москва-2013 Работа выполнена на кафедре акмеологии и психологии профессиональной деятельности Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Российская...»

«Бахвалов Павел Алексеевич Развитие схем на основе квазиодномерного подхода для решения задач аэроакустики на неструктурированных сетках Специальность 05.13.18 математическое моделирование, численные методы и комплексы программ Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата физико-математических наук Москва 2013 Работа выполнена на кафедре математического моделирования Московского физико-технического института (государственного университета) Научный руководитель...»

«САМЫЛИНА Екатерина Викторовна СТРУКТУРНЫЕ И СЕМАНТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОЦЕССУАЛЬНЫХ ФРАЗЕОЛОГИЗМОВ СО ЗНАЧЕНИЕМ ФИЗИЧЕСКОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ И ФИЗИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ В РУССКОМ И АНГЛИЙСКОМ ЯЗЫКАХ Специальность 10.02.20 – Сравнительно-историческое, типологическое и сопоставительное языкознание АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата филологических наук Челябинск – 2008 2 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального...»

«Дорохова Евгения Владимировна ОРГАНИЗАЦИОННО-ТЕХНИЧЕСКОЕ СТРУКТУРИРОВАНИЕ СИСТЕМЫ УЧЕТА В ПРОЦЕССЕ АВТОМАТИЗАЦИИ Специальность 08.00.12 – Бухгалтерский учет, статистика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата экономических наук Москва – 2007 Диссертация выполнена на кафедре учета, анализа и аудита экономического факультета Московского Государственного Университета им. М.В....»

«ГРУМ-ГРЖИМАЙЛО Ольга Алексеевна МИКРОМИЦЕТЫ ЗАБОЛАЧИВАЮЩИХСЯ ВОДОЕМОВ ПОБЕРЕЖЬЯ КАНДАЛАКШСКОГО ЗАЛИВА БЕЛОГО МОРЯ Специальность 03.02.12 – микология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2012 Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, на Беломорской Биологической станции имени Н.А....»

«Досова Анна Владимировна ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КОМПЛЕКСНОГО КРИМИНАЛИСТИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ДОКУМЕНТОВ С ИЗМЕНЕННЫМИ РЕКВИЗИТАМИ Специальность: 12.00.12 – криминалистика; судебно-экспертная деятельность; оперативно – розыскная деятельность Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата юридических наук Волгоград – 2014 Работа выполнена в федеральном государственном казенном образовательном учреждении высшего профессионального образования...»

«Корляков Константин Александрович ЧУЖЕРОДНЫЕ КОРОТКОЦИКЛОВЫЕ РЫБЫ В ВОДОЕМАХ ЮЖНОГО ЗАУРАЛЬЯ 03.00.16 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Екатеринбург-2010 Работа выполнена в ГОУ ВПО Тюменский государственный университет Научный руководитель доктор биологических наук, профессор МУХАЧЕВ Игорь Семенович Официальные оппоненты : доктор биологических наук БОГДАНОВ Владимир Дмитриевич кандидат биологических наук СИЛИВРОВ...»

«Злобина Мария Владимировна ИЗУЧЕНИЕ РЕМЕДИАЦИОННОГО ПОТЕНЦИАЛА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ, ДИКОРАСТУЩИХ И ДЕКОРАТИВНЫХ РАСТЕНИЙ Специальность 03.02.13 - почвоведение Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва - 2010       Работа выполнена на кафедре геологии и ландшафтоведения ив Испытательном центре почвенно–экологических исследований Научный руководитель : – заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Ганжара...»

«Федотова Марина Викторовна СЕМАНТИКА МОРАЛЬНОЙ ОЦЕНКИ У ГОМЕРА И АПОЛЛОНИЯ РОДОССКОГО Специальность 10.02.14 – Классическая филология, византийская и новогреческая филология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата филологических наук Москва -2008 1 Работа выполнена на кафедре классической филологии филологического факультета ФГОУ ВПО Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова Научный руководитель доктор филологических наук, профессор...»

«УДК 616-0.53.5.: 616.342-002.616.366 ХАРИТОНОВА ОЛЬГА ЮРЬЕВНА ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРОДУОДЕНИТА С СОПУТСТВУЮЩЕЙ ПАТОЛОГИЕЙ ЖЕЛЧНОГО ПУЗЫРЯ У ДЕТЕЙ И ВОПРОСЫ ТЕРАПИИ 14.00.09 – Педиатрия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Нижний Новгород – 2006 2 Работа выполнена в ФГУ Нижегородский научно-исследовательский институт детской гастроэнтерологии Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию Научный...»

«Королева Алла Альбертовна Химические трансформации бетулапренолов и полипренолов хвойных как основа синтеза соединений с прогнозируемой физиологической активностью 02.00.03 – Органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Иваново 2007 Работа выполнена в лаборатории лесохимии Института химии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии Наук. Научный руководитель : старший научный сотрудник, кандидат химических...»








 
2014 www.av.disus.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.