WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

МЕЗЕНЦЕВА

Марина Владимировна

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ

И НАПРАВЛЕННАЯ КОРРЕКЦИЯ

ЦИТОКИНОВОЙ РЕГУЛЯТОРНОЙ СЕТИ

14.00.36 - аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва – 2006 2

Работа выполнена в Государственном учреждении НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН

Научный консультант:

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор ЕРШОВ Феликс Иванович

Официальные оппоненты:

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор ЗВЕРЕВ Виталий Васильевич доктор медицинских наук, профессор МИХАЙЛОВ Михаил Иванович доктор медицинских наук, профессор ЯРИЛИН Александр Александрович

Ведущая организация:

Государственное учреждение НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского РАМН

Защита диссертации состоится « 09 » июня 2006 года в 1100 часов на заседании Диссертационного совета Д 001.007.01 при ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи (123098, г.Москва, ул. Гамалеи, д. 18)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи (123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 18) Автореферат разослан «05»мая_2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Е.В. РУСАКОВА Актуальность проблемы.

Происходящие климатические изменения, возрастание числа катастрофических событий на планете (землетрясения, цунами, ураганы), ускоренное развитие информационных технологий (компьютеризация, мобильная связь, телевидение), агрессивность средств массовой информации приводят к резкому ухудшению экологии человека и развитию стресс-зависимых заболеваний. В результате отмечается снижение сопротивляемости организма, ослабление иммунной системы, приводящее к развитию различных патологических изменений в организме (Онищенко Г.Г., 2002). В последние лет иммунологи отмечают неуклонное снижение показателей нормы иммунной системы здоровых людей (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2000). Параллельно наблюдается интенсивный рост числа вирусных и бактериальных инфекций, не поддающихся общепринятой терапии, появление новых неконтролируемых инфекций (SARS, птичий грипп), грозящих пандемиями. Резко увеличилось число больных страдающих аллергическими и аутоиммунными заболеваниями, новообразованиями, формируется популяция людей с вторичными иммунодефицитами, вызванными как хроническими инфекциями, так и рядом других техногенных факторов. В целом в России регистрируется не только сокращение населения, но и резкое ухудшение здоровья россиян. Если еще лет назад группа здоровых составляла 30% населения, то теперь она составляет не более 15%. Отмечено, что в первую очередь страдают тонкие регуляторные механизмы основных систем жизнедеятельности: системы иммунитета и системы интерферона (ИФН) и других цитокинов, включая механизмы естественной резистентности. Такие данные обусловливают актуальность углубленного исследования этих систем и поиска объективных методов их коррекции.

Современная практика защиты населения от инфекционных заболеваний включает 2 основных подхода: специфическая профилактика, связанная с использованием вакцин, и неспецифическая профилактика, направленная на включение механизмов врожденного иммунитета для повышения резистентности организма. Следует особо подчеркнуть, что в системе естественной защиты, особенно при вирусных инфекциях, ключевая роль принадлежит ИФН и цитокинам (Кетлинский С.А., Симбирцев А.А., Воробьев А.А., 1992, Ершов Ф.И., 1998, Фрейдлин И.С., 1998).

К сожалению, несмотря на достаточно большой набор препаратов для терапии различных заболеваний, проблема лечения многих из них, таких как вирусные гепатиты, генитальный герпес, новообразования, остается трудно разрешимой задачей. Поэтому крайнюю важность приобретает изучение механизмов действия новых лечебных препаратов. Необходимо также проводить исследование специфической активности лечебных средств и продукции цитокинов под действием исследуемых препаратов in vitro на различных клеточных моделях для предварительной оценки их эффективности с возможной экстраполяцией полученных результатов на организм человека, что позволит с высокой степенью достоверности прогнозировать лечебный эффект лекарств.

До настоящего времени практически не проводились комплексные исследования, охватывающие все многообразие взаимосвязей системы ИФН и цитокинов с иммунной системой в обычных условиях и при различных патологических процессах.

Представляется важным не только индивидуальный подход при обследовании больных, но и при выборе средств для профилактики и терапии заболеваний. Для решения этой задачи необходим комплекс мероприятий, направленных на обеспечение высокого уровня жизнедеятельности и работоспособности человека и на устранение причин заболевания и их предупреждение, в том числе с использованием лекарственных средств.

Новая информация о роли цитокинов в регуляции иммунитета и клиническом применении рекомбинантных цитокинов в иммунокорригирующей, гемостимулирующей, противоопухолевой и противовоспалительной терапии позволит подобрать адекватную тактику лечения при разных заболеваниях.

Инфекции, вызванные вирусами гепатитов, продолжают оставаться одной из основных проблем современного здравоохранения (Соринсон С.Н., 1997). Среди вирусных гепатитов доминирующее место занимают инфекции, вызванные вирусами гепатитов В и С (ВГВ и ВГС). Значительно выросли в последнее время показатели заболеваемостью ВГВ и ВГС в России, что связано с ростом наркомании. По сравнению с 1994г. (первым годом официальной регистрации ВГС) в 2002г. официальные показатели заболеваемости ВГВ и ВГС в России возросли в 7 раз. Однако истинные значения значительно выше, т.к. в ряде случаев эти инфекции, особенно - ВГС, протекают бессимптомно в течение многих лет. И если ВГВ поддается лечению, то хронизация при ВГС достигает 80%, что связано со способностью вируса к мутации под воздействием иммунного процесса (Шахгильдян И.В., Михаилов М.И., Онищенко Г.Г., 2003).

Заболевания, вызываемые вирусами семейства герпеса, являются хроническими и отличаются чрезвычайно широкой распространенностью. Наиболее значимыми из них являются: герпетическая инфекция, вызываемая вирусами герпеса простого 1 и 2 типов (ВПГ-1, ВПГ-2), и цитомегаловирусная (ЦМВ) инфекция. Антитела к ВПГ-1 и ВПГ- выявляются у 80-90% населения. В России острыми хроническими формами ВПГинфекций страдают около 30 млн. человек, и число их ежегодно возрастает (Исаков В.А. и Сафронова М.М., 1997, Каркищенко Н.Н., 2001).

Общим недостатком всех противогерпетических препаратов является их неспособность привести к элиминации возбудителя из организма. Более того, при отмене препаратов скажем, ацикловира, рецидивы заболевания повторяются с прежней частотой.

Основная масса противогерпетических средств наиболее активна при острых стадиях рецидивирующего герпеса и мало влияет на продолжительность ремиссии. К ряду химиопрепаратов развивается устойчивость, поэтому актуальной задачей остается поиск и изучение противовирусной и иммуномодулирующей активности новых эффективных препаратов для лечения этого заболевания.

В последние годы установлена связь между инфекционными агентами и соматическими заболеваниями. Например, Chlamydia pneumoniae выделяется более чем в 10% случаев пневмоний в детском возрасте. Chlamydia trachomatis является наиболее частым патогеном, передаваемым половым путем, и одной из причин потери зрения.

Выявлена связь между обнаружением Chlamydia pneumoniae и патогенезом атеросклероза, который занимает первое место в мире как причина смертности. Подтверждена взаимосвязь хронической хламидийной инфекции с хронической сердечно-сосудистой недостаточностью. В среднем в атероматозных бляшках сосудов хламидии обнаруживаются в 70% случаев (Каркищенко Н.Н., 2001).

В настоящее время сифилис остается по-прежнему одной из важнейших проблем здравоохранения в России. По официальным данным темпы роста заболеваемости сифилисом несколько снизились (2001г. - 124 человека на 100 тыс населения, 1996г. - человека на 100 тыс населения), однако эти данные далеко не полные. Во врачебной практике все чаще стали наблюдаться случаи развития серорезистентности после лечения сифилиса (до 20%), несмотря на полноценную терапию. В связи с этим поиску новых средств и схем лечения сифилиса уделяется большое внимание (Кулагин В.И., Пономарев Б.А., Селисский Г.Д., 2000).

Несмотря на разработку новых методов лечения, не решена также и проблема профилактики и лечения онкологических заболеваний. Смертность от новообразований с каждым годом увеличивается. Имеющиеся в арсенале врачей методы и средства их терапии часто не обладают высокой эффективностью. В связи с этим поиск новых подходов к лечению опухолевых патологий является оправданным.

Перечисленные заболевания, такие как гепатиты, генитальный герпес, онкологические и некоторые другие продолжают оставаться малоконтролируемыми, и пока не найдены препараты, полностью защищающие от них. Поэтому приобретает важное значение изучение механизмов функционирования всех звеньев иммунитета, а также подбор средств и схем для профилактики и терапии заболеваний инфекционной и неинфекционной природы.

Цель исследования:

Выявить закономерности функционирования цитокиновой регуляторной сети в норме и при патологии и на этой основе разработать способы коррекции нарушений иммунитета.

Задачи исследования:

1. Изучить in vitro особенности цитокиновых реакций (продукции интерферонов и других цитокинов) на начальном этапе развития инфекционного процесса.

2. Выявить закономерности изменений показателей иммунного и интерферонового (ИФН) статусов при инфекционных и неинфекционных заболеваниях.

3. Исследовать феномен ИФН-чувствительности и ИФН-резистентности как один из основных показателей функционирования системы ИФН у больных с разными формами патологии.

4. Исследовать состояние системы ИФН у больных с разными формами патологии (гепатиты, генитальный герпес, заболевания, передающиеся половым путем, рассеянный склероз, новообразования, серорезистентность после лечения сифилиса).

5. Провести сравнительную оценку системы ИФН и других цитокинов на уровне экспрессии их генов у больных с различными заболеваниями.

6. Выявить взаимосвязь между параметрами ИФН и иммунного статусов, а также цитокинового профиля, и эффективностью проводимой терапии с использованием новых иммуномодулирующих препаратов, таких как гепон, аллокин, искадор, арглабин.

7. Разработать стратегию и тактику коррекции иммунопатологических состояний:

определить основные параметры иммунного, ИФН и цитокинового статусов, при достижении которых наблюдается положительный эффект лечения, которые следует учитывать при выборе тактики лечения больных с разными формами патологии.

Научная новизна исследования.

Впервые разработан метод определения ИФН-чувствительности и исследована индивидуальная чувствительность больных с различными заболеваниями к интерферонам и их индукторам, что позволило реально прогнозировать эффективность иммуномодулирующей терапии и научно обосновать возможность индивидуального подбора наиболее эффективных препаратов.

Установлены нормы цитокинового профиля человека - одного из ключевых параметров, определяющих эффективность иммунного ответа.

Впервые показаны особенности продукции ИФН и других цитокинов разными линиями клеток на начальном этапе развития вирусной инфекции (ранние цитокиновые реакции, которые определяют последующий запуск иммунологических реакций).

Впервые определены изменения продукции ИФН и других цитокинов у больных с разными формами патологии (вирусные инфекции: гепатиты, герпес; урогенитальные заболевания; серорезистентность после лечения сифилиса; рассеянный склероз;

новообразования), отражающие особенности иммунного ответа при каждом заболевании, что существенно для понимания процессов межсистемных взаимодействий, механизмов и принципов иммунорегуляции.

Впервые показана корреляция между параметрами ИФН и иммунного статусов, а также цитокинового профиля, и эффективностью проводимой терапии при различных заболеваниях.

Разработаны эффективные способы диагностики, прогноза, профилактики и коррекции иммунопатологических состояний на основе комплексного исследования показателей, характеризующих ряд основных параметров иммунной системы.

Практическая значимость.

Предложена экспериментальная модель (клетки крови человека) для определения терапевтического эффекта лечебных средств при разных формах патологии.

Разработаны новые приоритетные методы определения ИФН-чувствительности и принципы определения чувствительности организма к лекарственным препаратам (ИФН, цитокинам, индукторам ИФН и другим иммуномодуляторам).

Разработан и внедрен в практику ведущих клиник г. Москвы комплексный метод расширенный ИФН статус для определения подходов к индивидуальной иммунокоррекции у человека.

Предложен комплексный подход, позволяющий моделировать с высокой степенью достоверности иммунный ответ на инфекцию и корректировать его с помощью лекарственных средств (химиопрепараты, ИФН, индукторы ИФН, иммуномодуляторы) для предупреждения развития инфекционного процесса. В основу отбора препаратов для коррекции иммунного ответа положены исследования продукции и действия ИФН и других цитокинов.

Внедрение результатов работы.

Материалы диссертации явились основой для создания следующих инструктивнометодических документов:

1) Методические рекомендации, утвержденные в НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи (1998):

«Определение клеточной чувствительности к интерферонам в цельной крови (расширение показателей ИФН-статуса)».

2) Методические указания Научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств (2002):

-Методические указания по определению индивидуальной чувствительности организма к интерферонам, другим цитокинам и индукторам интерферона, -Методические указания по проведению доклинических исследований цитокининдуцирующей активности антивирусных препаратов.

3) Методические указания Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития и Федерального государственного учреждения научный центр экспертизы средств медицинского применения (2005):

-Методические указания по изучению специфической противовирусной активности фармакологических средств, -Методические указания по изучению специфической активности индукторов интерферона.

4) Патенты РФ:

-Способ определения чувствительности живого организма к цитокину. Патент РФ на изобретение №2181889 от 27.04.2002, -Способ определения чувствительности живого организма и/или его клеток к воздействию вещества, поля или комбинации веществ и/или полей. Патент РФ на изобретение №2202363 от 20.04.2003.

Апробация диссертационной работы.

Основные материалы диссертации представлены на Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 1995, 1996, 1997, 1998, 2000, 2001, 2002, 2004, 2006), II Российской практической конференции «Гепатиты В,С,D,G-проблемы диагностики, лечения и профилактики» (Москва, 1997), VII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 1997), 8-й Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы» (Санкт-Петербург, 2000), IV Международном симпозиуме «Биологически активные добавки к пище: XXI век»

(Санкт-Петербург, 2000), IV съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2001), международном симпозиуме «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, 2001), 4 и научных конференциях «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2000, 2001), VII Всероссийском съезде неврологов (Москва, 2001), 16 Съезде оторинголарингологов России (Москва, 2001), научно-практической конференции «Медицина будущего» (Сочи, 2002), Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2002), VI Российском съезде врачей-инфекционистов (Санкт-Петербург, 2003), 3 Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2005), Четвертом конгрессе педиатров-инфекционистов России «Актуальные вопросы инфекционной патологии у детей (диагностика и лечение)» (Москва, 2006), конференции РАН «Фундаментальные науки – медицине» (Москва, 2006), 15 конференции ESACT «Animal Cell Technology: New Developments – New Applications» (Tours, 1997), I международном конгрессе по вакцинам и иммунизации (Istanbul, 1998), на международной конференции по интерферонам «Biology and Clinical Applicatons» (Venice, 1998), 11 международном симпозиуме «New Drugs in Cancer Therapy» (Amsterdum, 2000), 10 международном симпозиуме «Development and Delivery Challenges of the Next Generations of Drugs»

(Istanbul, 2000), 10 международной конференции по фармацевтической технологии (Florence, 2002), международных конгрессах ISICR, ICS и ECS (1997, 1998, 1999, 2000, 2001, 2003).

Диссертационная работа апробирована на совместной научной конференции отдела интерферонов и отдела иммунологии ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН 20 февраля 2006г.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 86 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа изложена на 280 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, 7 глав результатов исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, включающего отечественных и 158 зарубежных источников. Диссертация включает 65 таблицы, рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материалом для исследования являлись клетки, выделенные из гепаринизированной венозной крови здоровых добровольцев и больных с различными формами инфекционной и неинфекционной патологии. Основные группы обследованных составили:

1) 100 практически здоровых добровольцев (40 мужчин и 60 женщин в возрасте от 20 до 65 лет). Обследования проведены на базе клиники ГНЦ Институт иммунологии МЗ РФ.

2) 100 больных в возрасте 20-50 лет с диагносцированным генитальным герпесом, подтвержденным на основании серологического исследования методом иммунофлюоресцентного анализа на наличие антител (IgG и IgM) к вирусу простого герпеса 2 типа (ВПГ-2). Базовый курс лечения составлял 10 дней и включал в себя применение ацикловира, витаминов С и Е и препарата аллокин. Лечение пациентов проводили на базе клиники ГНЦ Институт иммунологии МЗ РФ.

3) 76 больных (25 мужчин и 51 женщины в возрасте от 25 до 56 лет) с верифицированным диагнозом рассеянный склероз (РС), из них 18 пациентов обследовано в динамике.

Церебро-спинальную форму заболевания имели 7 пациентов, спинальную - 1, ремиттирующее течение процесса - 17 пациентов, первично прогрессирующее течение - 1).

У этих больных проводили исследование ИФН статуса в начале лечения и в течение 6- месяцев в динамике каждые 10-20 дней. Лечение пациентов проводили препаратами ИФНи ИФН- на базе ГКБ №20 г.Москвы.

4) 380 больных (в возрасте от 16 до 50 лет) с верифицированным диагнозом острый вирусный гепатит С (ОВГС). Диагноз ОВГС подтверждался определением серологических маркеров (анти-HCV IgG, анти-HCV IgM, анти-core-HCV IgG), а также количественным анализом уровня РНК HCV c помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). У всех пациентов был исключен вирусный гепатит В (ВГВ) (в сыворотке крови отсутствовали маркеры ВГВ - HbsAg и анти-Hbcore IgM). Лечение пациентов проводили препаратами ИФН- или циклофероном, или аллокином на базе КИБ № 1 г. Москвы. У каждого пациента в динамике на протяжении всего лечения исследовали показатели иммунитета и проводили биохимический анализ крови, включающий обязательное исследование показателей билирубина, печеночных ферментов АСТ и АЛТ, тимоловой пробы.

5) 40 больных с верифицированным диагнозом хронический вирусный гепатит С (ХВГС), подтвержденный теми же методами, из которых 20 пациентов были с генотипом 3a и больных - с генотипом 1b. У каждого пациента в динамике на протяжении всего лечения исследовали показатели иммунитета и проводили биохимический анализ крови, включающий обязательное исследование показателей билирубина, печеночных ферментов АСТ и АЛТ, тимоловой пробы. Лечение пациентов проводили препаратами ИФН- или искадор на базе ГКБ им. С.П.Боткина г. Москвы.

6) 10 пациентов (в возрасте от 40 до 70 лет) с диагнозом меланома кожи с метастазами в лимфоузлы. Циклоферон в таблетках применяли у 5 пациентов в послеоперационный период по следующей схеме: 1 раз в сутки по 4 таблетки (0,6 гр. на прием) в 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23 дни. Остальные 5 пациентов составляли контрольную группу и циклоферон не применяли. Лечение пациентов проводили на базе ГКБ г. Твери.

7) 60 мужчин с диагнозом аденома простаты (65 - 70 лет). Обследование пациентов проводили на базе МОНИКИ.

8) 18 женщин (средний возраст больных составил 61,1 года) с первично установленным диагнозом местнораспространенного рака молочной железы со стадиями заболевания: II а, б и III а, б, цитологически верифицированными. По степени распространенности опухолевого процесса пациентки распределились следующим образом: IIа стадия (T2N0M0) – 6 больных; IIб стадия (T2N1M0) и (T3N0M0) – 4 больных; IIIа стадия (T1N2M0) – 7 пациенток; IIIб стадия (T4N2M0) – 1. Больные были обследованы в динамике до и после лучевой терапии с применением препарата арглабин. Лечение пациентов проводили на базе Карагандинской государственной медицинской академии МЗ РК, Казахстан.

9) 157 пациентов (в возрасте от 18 до 50 лет) с урогенитальными заболеваниями (хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез). Диагноз хламидиоз был подтвержден методом “золотой стандарт” в культуре клеток, уреаплазмоз – методом ИФА и РИФ, гарднереллез – бактериологическим методом. Обследование пациентов проводили на базе МОНИКИ.

10) 100 больных с СР после лечения сифилиса (в возрасте от 20 до 65 лет) до лечения и в течение 1 - 2 лет в процессе терапии, проводимой в соответствии с методическими рекомендациями по лечению и профилактике сифилиса (1999). Длительность заболевания составляла от 2 до 6 лет. Дополнительно к принятой схеме нами проводилось лечение цефтриаксоном (цефалоспориновый препарат III поколения) по 2 г внутримышечно ежедневно в течение 7 дней. Одновременно назначался курс иммуномодулирующей терапии (по общей схеме в течение месяца) в зависимости от индивидуальной чувствительности к иммуномодулятору (неовир, амиксин, полиоксидоний, гепон), и биоантиоксидант диквертин. Антибиотик назначался, начиная со второй инъекции иммуномодулирующего препарата. Иммунный и ИФН статусы исследовали в динамике у каждой группы больных с СР до лечения, через 2 месяца после начала лечения и через год. Лечение пациентов проводили на базе кафедры кожных и венерических болезней лечебного факультета РГМУ МЗ РФ и КВКД №1 КЗ г.Москвы.

Оценка клинического состояния больных в процессе лечения проводилась врачами в соответствующих лечебных учреждениях.

Определение иммунного статуса Показатели клеточного иммунитета определяли в соответствии с принципами, разработанными Р.В. Петровым с соавт. (1999 г.), включающими тесты I и II уровня и рекомендованными Минздравом СССР. Полученные результаты соотносили с общепринятыми физиологическими нормами, установленными ГНЦ - Институтом иммунологии МЗ РФ и одобренными Минздравом РФ (Г.Фримель, 1989 г.).

В тестах I уровня определяли:

общее содержание лейкоцитов в периферической крови:

процентное и абсолютное содержание лимфоцитов;

уровень сывороточных иммуноглобулинов классов A, M, G в сыворотке крови.

В тестах II уровня определяли:

относительное содержание отдельных субпопуляций лимфоцитов;

абсолютное содержание отдельных субпопуляций лимфоцитов;

иммунорегуляторный индекс;

концентрацию IgE в сыворотке крови.

Лимфоциты выделяли из свежей гепаринизированной венозной крови и использовали в дальнейшем исследовании. Субпопуляции лимфоцитов анализировали по специфическому мембранному свечению в ультрафиолетовом свете с помощью люминесцентного микроскопа МБИ-15-2 (НПО «ЛОМО», г. С.-Петербург). Относительное содержание лимфоцитов, экспрессирующих различные дифференцировочные антигены (процент светящихся лимфоцитов), учитывали на проточном цитофлуориметре FACScan (Becton Dickinson США). Уровень сывороточных иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с использованием тестсистем, разработанных в ГНЦ РФ - Институте иммунологии. IgE в сыворотке крови определяли методом полуколичественного иммуноферментного анализа.

Определение ИФН статуса и чувствительности к препаратам Исследовали следующие показатели:

1) продукция ИФН-, индуцируемая вирусом болезни Ньюкасла (ВБН);

2) продукция ИФН-, индуцируемая стандартным митогеном (стафилококковый энтеротоксин А - СЭА, фитогемагглютинин - ФГА, конканавалин А - КонА).;

3) уровень циркулирующего ИФН в плазме крови;

4) уровень спонтанно продуцируемого клетками крови ИФН;

5) уровень чувствительности к препаратам ИФН- (с использованием прайминг-эффекта).

Пациента считали чувствительным к ИФН-, если клетки его крови отвечали увеличением ВБН-индуцируемой продукцией ИФН при праймировании хотя бы одним из шести препаратов ИФН-: человеческий лейкоцитарный ИФН (ЧЛИ), лейкинферон, реаферон, реальдирон, интрон А, роферон А.

6) уровень чувствительности к препарату ИФН- - гаммаферону (с использованием прайминг-эффекта);

7) уровень чувствительности к индукторам ИФН - ридостину, циклоферону, амиксину и др. Пациента считали чувствительным к индукторам ИФН, если клетки его крови продуцировали ИФН при действии хотя бы одного из препаратов.

8) ИФН-ингибирующая активность или ИФН-стимулирующая активность плазмы или сыворотки крови.

Определение проводили в 96-луночных круглодонных планшетах, в которые вносили кровь, разведенную в 10 раз средой RPMI-1640 (с глютамином и антибиотиками) в трех повторах. В определенной последовательности вносили препараты ИФН-, ИФН-, ИФН- и индукторы ИФН, ВБН и один из стандартных митогенов (СЭА, ФГА, или КонА).

Планшеты инкубировали 24-48 часов в СО2-инкубаторе при 37°С. Оставшуюся кровь центрифугировали. Полученную плазму крови тестировали на присутствие циркулирующего ИФН, наличие ИФН-ингибирующей или ИФН-стимулирующей активности и на присутствие ряда цитокинов.

Определение активности ИФН Титрование ИФН проводили в 96-луночных плоскодонных планшетах с культурой диплоидных фибробластов человека, выращенных в ростовой среде до образования монослоя. В качестве индикаторного тест-вируса использовался вирус энцефаломиокардита мышей (ВЭМК). За единицу активности ИФН (Ед/мл) принималась величина, обратная его максимальному разведению, которое защищало 50% клеток от цитопатогенного действия 100 ТЦД50/мл вируса. В каждом титровании использовали также референс-препарат ИФН для перевода полученной активности ИФН в международные единицы (МЕ).

Определение ИФН-ингибирующей (ИИС) или ИФН-стимулирующей (ИСС) способности Определение ИИС/ИСС плазмы крови проводили параллельно с титрованием референс-препарата ИФН. Для этого после титрования ИФН в те же лунки добавлялась плазма крови, разведенная средой RPMI-1640 в отношении 1:4 (для предотвращения токсического воздействия плазмы крови на клетки в тест-системе). В зависимости от увеличения или подавления противовирусной активности референс-препарата ИФН делалось заключение о наличии ИИС или ИСС. Активность ИИС выражалась в интерферон-ингибирующих единицах (ИИЕ50/мл); активность ИСС выражалась в интерферон-стимулирующих единицах (ИСЕ50/мл).

Определение мРНК цитокинов Определение мРНК 11 цитокинов в мононуклеарах периферической крови (МПК) проводили с использованием методов обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР). Выделение РНК проводили по методике (Chomczynski P., Sacchi N., 1987) методом кислой гуанидин тиоцианат – фенол – хлороформ экстракции. Обратная транскрипция и ПЦР-амплификация были выполнены в соответствии с методикой, предложенной (С.М. Gelder, P.S Thomas, D. H. Yates et al., 1995). В работе были использованы пары праймеров для следующих цитокинов: ИФН- (С.М. Gelder, P.S Thomas, D. H. Yates et al, 1995), ИЛ-6, ИЛ-8 (Y. Lin, M. Zhang, P.F. Barnes, 1998), ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 ФНО-, ИФН- (M. Yamamura, K. Uyemura, R. J. Deans et al., 1991), ИЛGaede KI, Mamat U, Schlaak M et al., 1999), ИЛ-12 (Thomas S. Harrison, Stuart M. Levitz, 1996). В качестве положительного контроля использовали – актин (Y. Lin, M. Zhang, P.F.

Barnes, 1998). Регистрацию результатов ПЦР осуществляли электрофоретически в 2,5% агарозном геле, окрашенным бромистым этидием. Для идентификации нуклеотидных последовательностей использовали маркер для электрофореза фирмы Promega (G 1758).

Определение количественного содержания цитокинов методом ИФА Количественное содержание цитокинов в плазме/сыворотке и пробах цельной крови, индуцированных исследуемыми цитокинами и индукторами ИФН с последующей индукцией стандартными индукторами ИФН или без нее, определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием коммерческих тест-систем («Протеиновый контур», С.-Петербург, Россия).

Статистическая обработка результатов исследования Статистическую обработку результатов оценки иммунного статуса проводили с использованием программы StatGraph (версия 4.3) на компьютере PC IBM 486.

Для выявления значимых различий в динамике ИФН статуса в пределах одной группы обследованных применяли парный критерий Уилкоксона. Определялось среднее арифметическое (М) и стандартное отклонение (m).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Клеточная чувствительность к интерферонам (расширение показателей ИФН статуса) Первым этапом исследований было изучение клеточной чувствительности и резистентности к интерферонам. До начала исследований не были практически разработаны клинические тесты для определения уровня клеточной чувствительности к ИФН-1 и 2 типов. Совокупность ранее предложенных тестов давала возможность определять основные параметры ИФН-статуса у человека (Григорян С.С. и соавт., 1995):

количественные (методы первой ступени - определение в крови циркулирующего ИФН и уровней продукции спонтанного, вирус- и митоген-индуцированного интерферонов) и качественные (методы второй ступени - определение типов и кислотолабильности циркулирующего и спонтанно-продуцируемого ИФН).

Мы же предположили, что для более развернутой характеристики ИФН статуса, кроме определения уровней ИФН-продуцирующей способности клеток крови человека, необходимо охарактеризовать и ИФН-эффекторную функцию лейкоцитов периферической крови, т.е. определить уровень чувствительности клеток или организма человека к ИФНи ИФН-.

Для этого был разработан комплекс тестов с целью определения уровня клеточной чувствительности к ИФН, который использовался нами в дальнейшей работе для исследования вариабельности клеточной чувствительности к ИФН.

Предварительный анализ полученных данных показал, что среди здоровых и больных людей можно выделить следующие группы: 1.Чувствительные только к ИФН-;

2. Чувствительные только к ИФН-; 3.Чувствительные к ИФН- и -; 4.Резистентные к ИФН.

Отмечено, что среди здоровых людей преобладают чувствительные к обоим типам ИФН, резистентных к ИФН оказалось всего 7%.

У больных ВГС процентное соотношение в таких группах изменено и поэтому можно предположить, что это связано либо с изменением чувствительности к ИФН у больных гепатитом С, либо чаще гепатитом С болеют люди, чувствительные к обоим типам ИФН. Не исключено наличие обоих процессов.

При ИППП также происходит изменение чувствительности больных к интерферонам, и наиболее подвержены урогенитальным заболеваниям люди, резистентные к ИФН, а наименее - люди, чувствительные только к ИФН-.

При сравнении показателей ИФН статуса у здоровых добровольцев и больных вирусными и бактериальными заболеваниями отмечено, что продукция ИФН- подавлена у всех типов людей, кроме чувствительных к ИФН-. У всех типов обследованных также подавлена продукция ИФН-. Следует отметить появление у заболевших ИФНстимулирующей способности (ИСС) сыворотки крови в высоких титрах и отсутствие ИФН-ингибирующей способности ИИС сыворотки крови.

Таким образом, в результате проделанной работы было предложено понятие «расширенного ИФН статуса», в котором, кроме принятых ранее тестов, определяется чувствительность клеток крови к ИФН.

Полученные результаты легли в основу дальнейшего изучения роли ИФНчувствительности и ИФН-резистентности в развитии патологического процесса.

Чувствительность здоровых и больных людей к препаратам и индукторам ИФН- (ЧЛИ) ИФН- (6 препаратов) ИФН- (Гаммаферон) Чувствительные к ИФН- (6 препаратов), ИФНРезистентные к ИФНвсе препараты), ИФНЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ИНДУКТОРАМ ИФН Циклоферон Ридостин Примечание: ИППП – инфекции передающиеся половым путем, ОВГС – острый вирусный гепатит С, РС – рассеянный склероз.

В таблице 1 представлены данные о чувствительности 100 здоровых добровольцев и больных с различными заболеваниями – ИППП (300 человек), ОВГС (300 человек), рассеянный склероз (30 человек) и пациенты с новообразованиями (100 обследованных).

Клетки крови больных ИППП и ОВГС в большинстве случаев отвечали продукцией ИФН только на препараты ИФН-, а также одновременно на препараты ИФН- и -.

Наибольший процент чувствительных только к ИФН- наблюдался среди больных ИППП.

А наибольший % резистентных к препаратам ИФН- и - выявлен у больных РС.

К индукторам ИФН циклоферону и ридостину в большинстве случаев оказались чувствительны здоровые добровольцы, больные РС и больные с новообразованиями.

При этом отмечено, что ИФН-чувствительность характеризуется высоким потенциалом восстановления до нормальных характеристик при выздоровлении. Таким образом, этот показатель является одним из ключевых параметров алгоритма слежения за функциональным состоянием организма в норме и при патологии.

На примере РС нами рассмотрены изменения чувствительности клеток крови пациентов к иммуномодуляторам в процессе лечения. Представленные в таблице 2 данные показывают, что в результате лечения чувствительность к препаратам ИФН- и ИФН-, т.е. ИФН-1 типа, снижалась, а к ИФН- - практически не изменялась. В целом, число больных, резистентных ко всем препаратам ИФН, возрастало. Параллельно число больных, чувствительных ко всем препаратам ИФН, снижалось.

Изменение чувствительности к препаратам и индукторам интерферона при

ПРЕПАРАТЫ

ИФН- (Бетаферон) ИФН- – ЧЛИ Лейкинферон ИФН- (все препараты) ИФН- (Гаммаферон) Чувствительные (+) к ИФН-, ИФН-, ИФНРезистентные к ИФНвсе препараты), ИФНРезистентные к ИФН-,

ИФН-, ИФНЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ИНДУКТОРАМ ИФН

Циклоферон Ридостин В таблице 2 представлены данные, отражающие общую чувствительность клеток крови пациентов ко всем 6 исследованным препаратам ИФН-, а также показывающие изменение чувствительности больных РС к каждому из исследованных препаратов ИФНв процессе терапии. Видно, что у обследованных пациентов в процессе лечения чувствительность к ЧЛИ и реаферону не изменялась, а к препаратам реальдирон, лейкинферон, интрон А, роферон А – повышалась.

При этом отмечено, что у больных РС в процессе лечения продукция ИФН, синтезируемого их клетками крови под действием циклоферона и ридостина in vitro, практически не изменялась.

Полученные данные указывают на полигенный характер признаков чувствительности к ИФН и высокую лабильность ИФН-чувствительности в зависимости от клинической стадии заболевания.

Предложенные и апробированные подходы к первичной диагностике и характеристике ИФН-дефицита у больных РС позволили получить на клеточном уровне результаты, полностью соответствующие опыту клинического использования препаратов ИФН в комплексной иммунотерапии РС. Действительно, иммунологически опосредованные обострения, вызванные применением препаратов ИФН-; не подлежащая сегодня сомнению клиническая эффективность бетаферона; вариабельность чувствительности пациентов к лекарственным формам ИФН- – все эти клинические данные подтверждаются определенными клеточными реакциями и могут быть использованы для прайминга ЛПК больных медицинскими препаратами ИФН.

В дальнейшей работе мы предприняли попытку более глубокого изучения иммунной системы человека с использованием различных иммунологических методов исследования (иммунный, ИФН и цитокиновый статусы) для характеристики иммунных процессов, происходящих в организме, и выявления закономерностей формирования цитокиновой регуляторной сети в норме и при патологии.

Ранние цитокиновые реакции.

На начальном этапе развития острого инфекционного заболевания отмечается быстро развивающийся ответ организма на инфицирование, названный нами ранними цитокиновыми реакциями (РЦР). Практически сразу же после внедрения инфекционного агента наблюдается образование ИФН (главным образом ИФН-/), являющихся первым барьером для инфекции, которые активируют киллерный потенциал иммунной системы.

При этом локально в месте проникновения инфекционного агента осуществляются взаимосвязанные процессы такие, как ингибиция интерферонами репродукции возбудителя, удаление с помощью естественных киллерных клеток (ЕКК) инфицированного материала и защита вновь образованным ИФН окружающих незараженных клеток от возможного заражения. Эти реакции естественного иммунитета крайне важны, учитывая многократные встречи организма в течение жизни с различными возбудителями. Именно благодаря этим процессам в большинстве случаев предотвращается дальнейшая генерализация инфекции и болезнь не развивается.

Однако в некоторых случаях описанных эффектов ИФН оказывается недостаточно для предотвращения инфекционного процесса. Это наблюдается при сниженной сопротивляемости организма, дефектах системы ИФН, неблагоприятной экологической обстановке, стрессах и других причинах. В результате развивается острое или хроническое заболевание, и параллельно наблюдается продукция ранних цитокинов, активация CD4+ и CD8+ Т-клеток с последующим развитием Т- и В-клеточного ответа. Отмечается вариабельность РЦР при различных заболеваниях, и цитокиновый ответ может меняться в зависимости от проникающего в организм возбудителя. Важно подчеркнуть, что вырабатываемые при этом цитокины продуцируются практически всеми иммунокомпетентными клетками. Одним из самых ранних неспецифических ответов на инфекцию является продукция провоспалительных цитокинов (ИФН-/, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛИЛ-12).

Ранние цитокины, образующиеся при вирусных инфекциях

ВИРУСЫ ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ЦИТОКИНЫ

По данным литературы (Фрейдлин И.С., 1995) и результатам, полученным нами (табл.3), эффекторные механизмы на этапе РЦР при вирусных инфекциях включают продукцию ИФН 1 типа, активацию ЕКК, продукцию ИФН-, перераспределение лимфоцитов, экспрессию генов ИЛ-1 и ФНО, а также активацию продукции ряда провоспалительных цитокинов (ИЛ-6, ИЛ-12, ИЛ-18).

Все описанные явления, имеющие место при прогрессировании инфекции, необходимы для прерывания инфекционного процесса или для перехода к последующему специфическому иммунному ответу. В ряде случаев совокупность этих процессов может оказаться достаточной для остановки дальнейшего развития инфекции.

Вслед за РЦР включаются механизмы специфического иммунного ответа. Они протекают по известным схемам опосредованных CD4+ клетками цитокиновых реакций:

по типу Тh-1 или Тh-2. Эти механизмы хорошо изучены в отношении внеклеточных паразитов, но до сих пор не получено однозначных данных на преимущественный тип ответа на вирусные инфекции.

Как РЦР, так и специфический иммунный ответ можно моделировать в системах in vitro и in vivo. Но на практике у человека крайне редко можно уловить момент заражения и проследить РЦР. Чаще больные обращаются к врачу уже на стадии включения специфического иммунитета. При этом наилучшим подходом к иммунокоррекции является вмешательство на уровне цитокиновой регуляторной сети, а сами цитокины могут рассматриваться как новое поколение препаратов (Фрейдлин И.С., 1995).

ИФН статус и цитокиновый профиль в норме. Системный анализ и коррекция нарушений ИФН и цитокинового статусов Для понимания закономерностей изменений в системе ИФН и для коррекции состояния больных необходимо было сначала проведение исследований ИФН статуса и цитокинового профиля здоровых добровольцев. Результаты исследования ИФН статуса 100 добровольцев представлены в таблице 4.

Отмечено, что в современных условиях нормальные показатели ИФН статуса изменились по сравнению с принятыми ранее (Григорян С.С., 1995).

Для более подробного описания состояния системы ИФН и других цитокинов в норме, мы воспользовались методом оценки экспрессии генов цитокинов по продукции их мРНК. В таблице 5 представлены данные о количестве здоровых добровольцев с обнаруженными в клетках их крови мРНК цитокинов. У здоровых добровольцев практически не выявлялись мРНК ИФН-, ИЛ-2 и ИЛ-4, мРНК ФНО- и ИЛ- определялись в среднем в 70% случаев, мРНК остальных исследованных цитокинов была обнаружена у 10-30% здоровых людей.

Показатели интерферонового статуса здоровых добровольцев (n=100) Количество больных (в %, n=100) с повышенным содержанием цитокинов в сыворотке

ДО ЛЕЧЕНИЯ

ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ

При сравнении данных, полученных разными методами (биологическим, ИФА и ОТ-ПЦР), показано, что механизм выработки ИФН- у больных генитальным герпесом был нарушен на разных этапах синтеза: транскрипции (наличие мРНК) и продукции (биологический метод и ИФА). Выявленные нарушения не восстанавливались в течение 10-дневного курса терапии, что являлось показанием к продолжению лечения либо изменению терапии.

Напротив, что касается изменений в синтезе ИФН-, у обследованных пациентов в процессе лечения отмечена тенденция к нормализации на уровне транскрипции и продукции этого цитокина.

При этом на начальном этапе лечения у большинства обследованных больных ( человек из 100) отмечено клиническое улучшение, проявившееся в снижении тяжести симптомов интоксикации и местных проявлений. В дальнейшем (в течении 1 года) у этих пациентов отмечалось снижение длительности и частоты рецидивов.

В таблице 13 схематически представлены данные, показывающие зависимость эффективности лечения от уровня и спектра цитокинов, выявляемых в сыворотке крови и МПК больных.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ГЕНИТАЛЬНЫМ ГЕРПЕСОМ В

ЗАВИСИМОСТИ ОТ УРОВНЯ ЦИТОКИНОВ

положительный отрицательный положительный отрицательный Видно, что положительный клинический эффект наблюдался у пациентов с выраженной нормализацией или тенденцией к снижению в процессе лечения содержания всех исследованных цитокинов в сыворотке крови больных, а также с повышенной способностью МПК к выработке ИФН- и ИЛ-4.

Напротив, отрицательный клинический эффект лечения наблюдался у пациентов при увеличении уровня ИФН-, ИЛ-1, ИЛ-6 в сыворотке крови больных и при полном угнетении способности МПК к выработке ИФН- и ИЛ-4.

Анализ полученных данных позволил прийти к заключению, что особенности иммунного ответа при генитальном герпесе характеризуются изменениями продукции интерферонов (нарушение в основном показателей ИФН-) и других цитокинов (усиление экспрессии генов и/или продукции ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-18).

Отмечено, что параметры ИФН статуса и цитокинового профиля при генитальном герпесе отражают эффективность проведенной терапии. Показано, что до лечения у больных генитальным герпесом наблюдалась активация клеточного и гуморального иммунитета. На начальном этапе терапии (10 дней) происходила стимуляция активности Тh1, В-лимфоцитов и естественных киллеров и супрессия Тh2, что и приводило в большинстве случаев к положительному клиническому эффекту.

Обнаружено, что при отрицательном клиническом эффекте у больных генитальным герпесом может не изменяться экспрессия генов ряда цитокинов, но при этом продукция ИФН- и чувствительность к препаратам ИФН- снижается или не изменяется и остается ниже нормальных значений.

Исследование интерферонового статуса и цитокинового профиля у онкологических больных Нами были проведены исследования по схеме, описанной выше, при неинфекционной патологии, в частности при раке молочной железы. Исследование ИФН статуса и цитокинового профиля больных показало нарушение ряда показателей иммунитета у обследованных пациентов.

У больных до лечения отмечены следующие отклонения от нормы (табл.14):

1. Снижение способности к продукции ИФН- практически у всех пациентов.

2. Снижение способности к продукции ИФН- у 80% обследованных.

3. Снижение чувствительности к химиопрепаратам и к препаратам ИФН.

4. Повышение ИФН-- и ИФН--ингибирующей активности сыворотки крови у 20% и 40% пациентов соответственно.

Результаты исследования ИФН статуса больных после химиотерапии (с применением препарата арглабин) также представлены в таблице 14. Как было показано ранее (Балдуева И.А., 1996; Баймахашева А.Н, 2000), арглабин обладал антипролиферативной и иммуномодулирующей активностью.

У обследованных больных после лечения отмечено:

1. Снижение спонтанно вырабатываемого ИФН у всех пациентов.

2. Повышение до нормы способности к продукции ИФН- и ИФН- в среднем у 40% больных.

3. Повышение чувствительности к препаратам ИФН и иммуномодуляторам.

Описанные изменения ИФН статуса являются положительным прогностическим признаком при терапии.

Нарушения интерферонового статуса у больных раком молочной железы Показатели ИФН Количество больных (в %, n=18) с нарушениями Циркулирующий ИФН в плазме крови Спонтанно вырабатываемый ИФН Продукция ИФНПродукция ИФНЧувствительность к ИФНЧувствительность к ИФНИФН-- ингибирующая активность плазмы крови ИФН-ингибирующая активность плазмы крови Чувствительность к индукторам ИФН (ридостин, циклоферон, амиксин) Ридостин Циклоферон Амиксин Нативный Гидрохлорид диметиламиноарглабин Следует отметить, что у 10-20% обследованных обнаружено ухудшение некоторых показателей ИФН статуса после лечения (табл.14). Этот факт может свидетельствовать о недостаточности объема проведенной терапии.

Также было показано (табл. 15), что при исследуемой патологии по сравнению со здоровыми добровольцами повышалось число людей, у которых определялись мРНК ИФН-, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10 и ИЛ-18. При этом по сравнению со здоровыми добровольцами выявлено снижение количества пациентов с выявленной мРНК ИФН- и ИЛ-12. Следует отметить, что у 78% больных отмечена экспрессия гена ФНО- на уровне здоровых добровольцев.

После лечения у тех же больных в среднем обнаружено снижение активности мРНК ФНО-, ИЛ-8 и ИЛ-12, а также активация экспрессии генов ИЛ-1, ИЛ-2 и ИЛ-6.

Отмечено, что при положительном клиническом эффекте у большинства пациентов определялась мРНК ФНО- (70% больных).

Также показано, что у всех больных с положительным клиническим эффектом в ходе терапии отмечена экспрессия генов ИФН- и ИЛ-2 или только ИЛ-2, а мРНК ИЛ- определялась в 2 раза чаще, чем у пациентов без положительных изменений. Известно, что эти цитокины принимают участие в развитии Th1-типа иммунного ответа, и подавление активности Тh1 со снижением выработки ИФН- или ИЛ-2 приводит к более тяжелому течению заболевания. Следовательно, терапия с применением арглабина, судя по этим показателям, может быть эффективна.

Проведенные исследования также показали, что мРНК ИЛ-1 после лечения определялась практически у всех обследованных больных. При этом отмечена продукция мРНК ИЛ-6 и ИЛ-8 при положительном клиническом эффекте у 70% и 60% пациентов, соответственно, а при стабилизации состояния – у 80% и 70% больных, соответственно.

Так как ИЛ-1, ИЛ-6 и ИЛ-8 являются медиаторами воспаления, полученные результаты могут свидетельствовать о недостаточности проведенной терапии. Об этом может также свидетельствовать факт активации экспрессии генов антивоспалительных цитокинов (ИЛили ИЛ-10) у 70% больных после лечения, так как известно, что увеличение синтеза именно этих цитокинов приводит к подавлению активности Тh1 со снижением выработки ИФН- и более тяжелому течению заболевания.

Синтез мРНК цитокинов у здоровых добровольцев (n=100) и больных раком мРНК Количество людей (в %) с Количество больных (в %) после Одновременно с исследованием ИФН статуса и оценкой экспрессии генов цитокинов по синтезу их мРНК, у тех же больных раком молочной железы определяли содержание цитокинов (методом ИФА) в сыворотке крови и при культивировании клеток крови (табл.16). При этом у пациентов до лечения были выявлены следующие изменения:

1. Повышенное содержание в сыворотке крови (>50пкг/мл) ИЛ-1, ИЛ-4 и ФНО- у 30больных, а ИЛ-2 и ИФН- – у 60-70% пациентов.

2. Снижение количества ИФН- в сыворотке крови у всех обследованных (50пкг/мл) или клетках крови Примечание: * - снижение количества цитокина, ** - повышение количества цитокина после лечения.

После курса проведенного лечения отмечена нормализация или тенденция к нормализации количества ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-, ИФН- и ИФН-, определяемых в сыворотке крови, у 20-40% обследованных женщин. При этом показано, что у 10-30% больных содержание этих цитокинов в сыворотке крови повышалось, что могло свидетельствовать об активации клеток иммунной системы.

При сравнении данных, полученных разными методами (биологический, ИФА и ОТ-ПЦР), были отмечены изменения в синтезе некоторых цитокинов, соответствующие положительному или отрицательному клиническому эффекту (табл. 17). Показано, что механизм выработки ИФН- у больных раком молочной железы был нарушен на посттранскрипционном уровне, т.е. у всех пациентов отмечено наличие в МПК мРНК ИФН-, но, в то же время, выявлено снижение продукции этого цитокина клетками крови и в сыворотке крови (биологический метод и ИФА). Выявленные нарушения восстанавливались после курса терапии препаратом арглабин или имели тенденцию к восстановлению у 7 больных из 18 обследованных (40%), что является важным показателем клинического улучшения.

Что касается изменений в синтезе ИФН- и других исследованных цитокинов, у обследованных пациентов в процессе лечения отмечена тенденция к нормализации их синтеза на уровне транскрипции (ОТ-ПЦР) и продукции (ИФА / ИФН статус).

Изменение синтеза цитокинов и эффект лечения у больных раком молочной железы Примечание: * - (активация), (подавление), (активация/подавление), N – норма.

После лечения у 7 из 18 обследованных больных отмечено клиническое улучшение.

Именно у этих пациентов в большинстве случаев отмечено восстановление механизмов синтеза следующих цитокинов (табл.17):

- цитокинов, вырабатываемых Th1-лимфоцитами, как ИФН-, так и ИЛ-2 (обязательно оба);

- антивоспалительного цитокина – ИЛ-4 в большинстве случаев (обязательно – активация до или после терапии);

- ФНО-, обладающего избирательной цитотоксичностью в отношении опухолевых клеток (обязательно – активация до или после терапии), а также - ИЛ-1, способного опосредовать развитие системного острофазного ответа и в значительной степени сходного с ФНО- по функциональной активности.

Данные о состоянии системы интерферона и цитокинов у больных раком молочной железы свидетельствуют о возможности иммунокорригирующей терапии у данной группы больных. При этом необходимо учитывать клиническое состояние больного и индивидуальные нарушения в иммунной системе, которые можно обнаружить при исследовании ИФН, иммунного и цитокинового статуса, что и способствует подбору схем лечения, контролю и прогнозированию эффективности терапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Подводя итог проведенным исследованиям, можно выделить закономерности изменений цитокинового профиля, отмеченные при обследовании больных острым и хроническим вирусным гепатитом С, генитальным герпесом, а также раком молочной железы (табл. 18).

Изменение синтеза цитокинов при разных формах патологии по сравнению со ИФН- мРНК Продукция ИФН- мРНК Продукция ИЛ-1 мРНК ИЛ-2 мРНК ИЛ-4 мРНК ИЛ-6 мРНК ИЛ-8 мРНК ИЛ-10 мРНК ИЛ-12 мРНК ИЛ-18 мРНК ФНО- мРНК Примечание: ВПГ-2 – генитальный герпес, ОВГС – острый вирусный гепатит С, ХВГС 1b или 3a – хронический вирусный гепатит С с генотипами 1b или 3a, РМЖ – рак молочной железы.

Суммируя основные результаты проведенных исследований, можно заключить, что:

- При всех изученных заболеваниях синтез ИФН- нарушен на посттранскрипционном уровне. У всех пациентов отмечено наличие мРНК ИФН-, но, в то же время, выявлено снижение продукции этого цитокина, регистрируемой биологическим методом и ИФА.

- Синтез ИФН- нарушен на уровне экспрессии гена при генитальном герпесе, ОВГС и ХВГС 1b, а при ХВГС 3а и РМЖ синтез ИФН- нарушен на посттранскрипционном уровне.

- мРНК ИЛ-2 определялась гораздо чаще, по сравнению со здоровыми добровольцами, при генитальном герпесе, ХВГС 3а и РМЖ, и лишь при ОВГС и ХВГС 1b экспрессия гена ИЛбыла отмечена в некоторых случаях на уровне здоровых добровольцев.

- Продукция мРНК ИЛ-12 снижена при всех изученных заболеваниях, кроме ОВГС.

Экспрессия гена ИЛ-18 при всех заболеваниях значительно выше, чем у здоровых добровольцев.

- Механизмы синтеза цитокинов, стимулирующих клеточно-опосредованные реакции (Тип-1 цитокины) в основном нарушены на уровне экспрессии их генов.

- Гены цитокинов, усиливающих гуморальный иммунитет (Тип-2) – ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10, могут экспрессироваться, в той или иной степени, на уровне здоровых добровольцев при вирусных заболеваниях: генитальном герпесе (ИЛ-6, ИЛ-10), ОВГС и ХВГС 1b (ИЛ-4, ИЛХВГС 3а (ИЛ-10). Лишь при РМЖ продукция мРНК этих цитокинов определяется значительно чаще, чем у здоровых людей.

- Экспрессия генов ряда цитокинов (медиаторов воспаления) отмечалась на уровне нормы:

ИЛ-1 при ХВГС 3а, вероятно, уже не вырабатывается; ИЛ-8 при ОВГС, вероятно, еще не вырабатывается; ФНО- при РМЖ, что является благоприятным прогностическим признаком.

Результаты исследования цитокинового профиля и ИФН статуса наглядно продемонстрировали снижение противовирусного иммунитета практически у всех обследованных больных. Он выражается нарушением механизмов синтеза ИФН- и дисбалансом функций клеточного и гуморального звеньев иммунитета.

Описанные закономерности синтеза цитокинов при всех исследованных заболеваниях свидетельствовали о том, что у большинства больных стадия РЦР завершена и произошло включение специфического иммунного ответа.

Изменение синтеза цитокинов у больных с различными заболеваниями после лечения (по сравнению со здоровыми добровольцами) ИФНмРНК Прод.

ИФН- мРНК Прод.

ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ФНО- мРНК Примечание: ВПГ-2 – генитальный герпес, ОВГС – острый вирусный гепатит С, ХВГС 1b или 3a – хронический вирусный гепатит С с генотипами 1b или3a, РМЖ – рак молочной железы.

Определение тех же показателей цитокинового профиля больных после лечения с применением традиционных методов и новых иммуномодулирующих препаратов показало (табл.19), что:

1. При всех заболеваниях происходит активация экспрессии генов цитокинов, продуцируемых Тh1 (ИФН- и ИЛ-2), приводящая к нормализации в большинстве случаев продукции ИФН-. Лишь при генитальном герпесе в некоторых случаях отмечено снижение числа пациентов с выявленной мРНК ИФН- и как следствие – снижение продукции этого цитокина. А при ХГС 3а в большинстве случаев отмечено нарушение синтеза ИФН- на посттранскрипционном уровне.

2. Выявлена активация либо нормализация экспрессии генов ИЛ-12 и ФНО- при ОВГС и ХВГС разных генотипов вируса.

3. Отмечен синтез мРНК антивоспалительных цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10. Лишь при генитальном герпесе и РМЖ экспрессия гена ИЛ-10 в некоторых случаях наблюдалась на уровне здоровых добровольцев.

4. Экспрессия генов ИЛ-1, ИЛ-6 и ИЛ-8 после лечения при исследованных патологических состояниях оставалась в основном на прежнем уровне, лишь при РМЖ отмечена нормализация синтеза мРНК ИЛ-8.

В целом, проведенный комплекс клинико-лабораторных исследований позволил нам:

1. Определить закономерности изменений в синтезе ИФН и других цитокинов на разных этапах экспрессии их генов (транскрипции и продукции) у больных с разными заболеваниями.

2. Установить существующую взаимосвязь между параметрами ИФН и иммунного статусов, а также цитокинового профиля, и эффективностью проводимой терапии.

3. Выделить основные параметры иммунного, ИФН и цитокинового статусов, нормализация которых коррелирует с положительным эффектом лечения.

Таким образом, индивидуальные исследования ИФН, иммунного и цитокинового статусов больных не только выявляют нарушения в иммунной системе, но и отражают защитный потенциал каждого пациента при конкретном заболевании, являясь основой для подбора рациональных схем лечения, контроля и прогнозирования эффективности терапии.

Предложенный нами комплексный подход позволяет моделировать иммунный ответ на инфекцию и корректировать его с помощью лекарственных средств для предупреждения дальнейшего развития патологического процесса. Мы полагаем, что это достигается при использовании ряда известных лечебных средств (химиопрепараты, препараты ИФН и других цитокинов, индукторы ИФН, иммуномодуляторы). При этом в основе отбора препаратов должно лежать выявление механизмов действия препаратов на систему ИФН и цитокинов.

Исследования, проведенные нами совместно с клиницистами, показали целесообразность предварительного подбора лечебных препаратов in vitro в каждом конкретном случае, т.к. клиническая эффективность терапии при этом возрастает в среднем в 2-3 раза (табл 20).

Клиническая эффективность в зависимости от назначения иммуномодулирующих ЗАБОЛЕВАНИЕ Клинические улучшения при Клинические улучшения без гепатиты В, С Генитальный Урогенитальные заболевания сифилиса гортани В целом, определение индивидуальной чувствительности больных с различными заболеваниями к интерферонам и их индукторам позволяет реально прогнозировать эффективность иммуномодулирующей терапии и создает научно обоснованную возможность подбора наиболее эффективных препаратов для каждого конкретного пациента.

ВЫВОДЫ

1. Впервые изучены закономерности функционирования цитокиновой регуляторной сети в норме и при различных иммунопатологических состояниях.

2. Обосновано существование клеточной чувствительности или резистентности к действию интерферонов у человека, которые являются индивидуальными показателями и меняются в зависимости от заболевания и тактики лечения. При вирусных инфекциях преобладают больные, чувствительные к ИФН- и ИФН-, а при неинфекционных заболеваниях - резистентные к этим интерферонам.

3. Возрастание риска заболеваемости гриппом и ОРВИ в осенне-зимний период сопровождается нарушениями практически всех показателей ИФН статуса и цитокинового профиля. Полученные данные свидетельствует о подавлении противовирусного иммунитета и о возрастании риска инфицирования возбудителями респираторных инфекций, что требует адекватной коррекции для профилактики инфекционных заболеваний в предэпидемический период.

4. Выявленные у здоровых добровольцев изменения показателей ИФН статуса по сравнению с принятыми ранее и повышенное содержание в сыворотке крови провоспалительных цитокинов ИФН- и ИЛ-1, а также антивоспалительного цитокина ИЛ-4 указывают на возможные механизмы снижения популяционного иммунитета у людей.

5. Впервые установлена зависимость характера изменений показателей системы интерферона и цитокинов от генотипа вируса гепатита С, что является важным при назначении лечения и прогнозировании положительного эффекта терапии.

6. Впервые выявлены общие закономерности изменения показателей интерферонового статуса, отмеченные при наличии и отсутствии эффекта терапии, и определены оптимальные способы иммунокоррекции у больных с разными заболеваниями.

7. У больных вирусными инфекциями (гепатит, герпес) в большинстве случаев отмечается положительный клинический эффект, если на начальном этапе терапии проводимое лечение вызывает стимуляцию активности Тh1-, В-лимфоцитов и естественных киллеров и супрессию Тh2-лимфоцитов.

8. Положительная динамика лечения больных с неинфекционной патологией наблюдается при активации Т-клеточного звена иммунитета (как Тh1, так и Тh2) и ЕКК, а также при нормализации индекса иммунорегуляции и показателей гуморального иммунитета.

9. Разработанные принципы индивидуальной иммунокоррекции больных с различными заболеваниями на основе определения показателей интерферонового, иммунного и цитокинового статусов рекомендуются для подбора рациональных схем лечения, контроля и прогнозирования эффективности терапии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Предложенные новые методические подходы, представленные комплексом тестов, позволяют определять индивидуальную чувствительность больных с различными заболеваниями к препаратам интерферона (ИФН), цитокинам, индукторам ИФН и другим лечебным средствам и, в соответствии с полученными результатами, реально прогнозировать эффективность терапии, что создает научно-обоснованную возможность подбора препаратов для каждого конкретного пациента и подбора схем лечения.

Предложенные методы позволяют изучить ИФН и другие цитокины как сигнальные молекулы, способные контролировать состояние организма при ряде инфекционных и неинфекционных заболеваний.

Предложенные и апробированные новые комплексы доклинических методов определения цитокинового ответа позволяют:

1) исследовать цитокин-индуцирующую активность лекарственных средств in vitro, что важно для предварительной оценки эффективности препаратов;

2) определять предполагаемый терапевтический эффект исследуемых препаратов и обосновывать направление коррекции цитокинового профиля на клетках крови человека.

Расширенное исследование спектра цитокинов, продуцируемых in vitro клеточными культурами различной природы и клетками крови человека под действием лекарственных средств и их комбинаций, позволяет прогнозировать и определять возможность клинического использования исследуемых препаратов при разных формах патологии, а также в доклинических условиях отработать оптимальные схемы введения препарата.

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Тазулахова Э.Б., Мезенцева М.В., Паршина О.В., Гусева Т.П. Новые подходы к оптимизации схем применения индукторов интерферона. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 1995, стр.313.

2. A.N.Narovlyansky, A.M.Amchencova, M.V.Mezentseva, F.I.Ershov. Analisis of Interferon’s sensitivity of Human Beings: the Clinical Test with Interferon Priming Effect. // European Cytokine Network. V.7 N3, 1996, p. 3. M.V.Mezentseva, A.N.Narovlyansky, A.M.Amchencova, F.I.Ershov. Clinical Analisis of IFN-producting and IFN-effected Systems. // там же, p. 4. В.В.Яворский, М.В.Мезенцева, О.В.Короткова, С.В.Амфилов, А.М.Федосюк, А.В.Коржаков, В.В.Малиновская. Применение Виферона в онкологической практике (первый опыт). // в кн. «Новые перспективы применения препаратов интерферона в педиатрии и гинекологии», СПб, 1997, стр.7-8.

5. Тареева Т.Г., Шумина А.В., Ткачева И.И., Котов Ю.Б., Мезенцева М.В., Паршина О.В. Виферонотерапия в профилактике тяжелых форм внутриутробной инфекции. // в кн. «Новые перспективы применения препаратов интерферона в педиатрии и гинекологии», СПб, 1997, стр.22-23.

6. В.Ф.Учайкин, Т.В.Чередниченко, В.В.Малиновская, О.Б.Ковалев, Ф.С.Харламова, Г.В.Чаплыгина, В.А.Конев, О.В.Паршина, М.В.Мезенцева, Т.П.Гусева. Применение рекомбинантного интерферона-альфа-2 при хронических гепатитах В, С и Д у детей. // в кн. «Новые перспективы применения препаратов интерферона в педиатрии и гинекологии», СПб, 1997, стр.34-35.

7. М.В.Мезенцева, Д.Г.Хусаинова, В.В.Малиновская. Иммуностимулирующий эффект препарата Виферон при урогенитальных инфекциях. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 1997, стр. 8. М.В.Мезенцева, Л.И.Хреновская, Р.А.Хошабаева, В.А.Мозговой, Л.Ю. Мозговая.

Иммунотерапия детей с ортопедическими нарушениями. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 1997, стр.225.

9. М.В.Мезенцева, Н.А.Селиванов, А.Н.Наровлянский. Чувствительность к интерферонам у больных гепатитом С. // Материалы II Рос. практич. конфер.

“Гепатиты В,С,D,G-проблемы диагностики, лечения и профилактики” 10. A.Narovlyansky, M.Mezentseva, T.Kondratieva, F.Ershov. The Influence of Ridostin and Cycloferonum on IFN Production in Cells of Mice with T- and B-immunodeficites. // Jornal of Interferon & Cytokine Research V.17, 1997, p.94.

11. Наровлянский А.Н., Мезенцева М.В., Амченкова А.М., ЕршовФ.И. Клинический тест с использованием прайминг-эффекта интерферонов для анализа ИФНэффекторной системы у людей. // Материалы VII Съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, М., 1997, стр.126-127.

12. М.В.Мезенцева, А.Н.Наровлянский, А.М.Амченкова, В.В.Парфенов, В.В.Малиновская, Ф.И.Ершов. Методические рекомендации «Определение клеточной чувствительности к интерферонам в цельной крови (расширение показателей ИФН-статуса).» // НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи, 1998, С.8.

13. В.В.Макашова, Н.В.Деленян, М.А.Рязанцева, М.В.Мезенцева, Т.С.Гусева, О.В.Паршина, В.В.Малиновская. Применение отечественного препарата Виферон у больных хроническим вирусным гепатитом С. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 1998, стр.128.

14. M.V.Mezentseva, V.A.Mozgovoi, L.Yu.Mozgovaya, R.Ya.Podchernyaeva. The New Type of Immunomodulator. // Kluwer Academic Publishers, “New Developments and New Applicatios in Animal Cell Technology.” (780 pages) 1998, p.613-615.

15. M.Mezentseva, A.Narovlyansky, M.Tsvetnova, M.Ryazantseva, F.Ershov. Stimulators of IFN Action as the Factors for Determination of the HCV Infection’s Pathogenesis. // International Conference on Interferons. Biology and Clinical Applicatons. 1998, p.79.

16. A.N.Narovlyansky, M.V.Mezentseva, A.M.Amchencova, M.V.Tsvetnova, F.I.Ershov.

Interferon Sensitivity: Clinical Aspect. // Там же, p.82.

17. M.Tsvetnova, M.Mezentseva, S.Kraevoy, A.Narovlyansky, F.Ershov. Treatment of Patients with Urogenital Infections by IFNs and IFN Inducers. // European Cytokine Network. V.9, N3, 1998, p.529.

18. M.Tsvetnova, M.Mezentseva, E.Troshina, R.Podchernyaeva F.Ershov, A.Narovlyansky.

Individual Correctin of IFN-sensitivity and IFN-production by IFNs and Other Cytokines.

// там же., p. 19. N.Delenian, V.Makashova, L.Pavlova, M.Ryazantseva, M.Mezentseva, V.Malinovskaya.

Pathogenetically Confirmed Therapy of Chronic Viral Hepatitis C by Recombinant Interferon Alpha-2b with Preparations of Antioxidant Action. // там же, p.427.

20. V.Parfenov, V.Malinovskaya, V.Yavorsky, M.Mezentseva, O.Korotkova, S.Amphilov.

Viferon in Oncology. // там же, p.508.

21. A.N.Narovlyansky, M.V.Mezentseva, A.V.Sanin, A.V.Pronin, A.M.Amchencova, L.L.Danilov, S.D.Maltsev, F.I.Ershov. The Influence of Phosprenyl upon the Action of Interferon Inducers. // там же, p.435.

22. M.V.Mezentseva, A.N.Narovlyansky, M.V.Tsvetnova, N.V.Kasyanova, F.I.Ershov. New Method for Determination of Immunoreactivity in Patients with Viral and Other Pathologies. Optimization of Immunotherapy. Havanna-99.

23. Kasyanova N.V., Mezentseva M.V., Bychenko D.V., Narovlyansky A.N., Ershov F.I.The Usage of Cycloferon in Therapy of Active Hepatitis C in Drug Addicts. // Jornal of Interferon & Cytokine Research V.19, 1999, p.109.

24. A.Vasiliev, M.Mezentseva, G.Puchkova, A.Khoduakova, R.Vasilenko, D.Dolgikh, V.Zav’yalov. Antiviral Activity of the Synthetic Peptide -Peptoferon, Corresponding to Amino Acid Sequence 130-137 of Human IFN-. // там же, p.113.

25. Mezentseva M.V., Tsvetnova M.V., Kasyanova N.V., Ershov F.I., Narovlyansky A.N.

Effects of the Blood Serum that Inhibit or Stimulate IFN Action in Patients with Viral Pathology. // там же, p.113.

26. A.N.Narovlyansky, A.M.Amchencova, M.V.Mezentseva, F.I.Ershov. Response of Blood Cells to the Interferon Action in Viral Pathology. // там же, p.113.

27. A.Khoduakova, D.Dolgikh, M.Mezentseva, G.Puchkova, A.Vasiliev, R.Vasilenko, G.Kozlovskaya, A.Vartapetian, V.Zav’yalov. Dinamics of Interferon Production and Formatio of Antiviral Protection, Induced by Human Prothymosin- in Rabbits and Cell Culture. // там же, p.118.

28. Л.Г.Ерохина, Н.С.Чекнева, Н.А.Кобякина, Г.С.Алексеева, М.В.Мезенцева, С.Б.Чекнев. Возможности прогнозирования эффекта бетаферона у больных рассеянным склерозом. // М, Вестник практической неврологии. №5, 1999, стр. 88Мезенцева М.В., Оспельникова Т.П., Кобякина Н.А., Чекнев С.Б., Ершов Ф.И.

Изменение выработки интерлейкина-4 у больных рассеянным склерозом. // СПб, Медицинская иммунол. т.2, №2, 2000, стр. 180-181.

30. Кобякина Н.А., Мезенцева М.В., Чекнев С.Б., Скворцова В.И. Интерфероновый статус и чувствительность клеток к интерферону в ходе иммунотерапии у больных рассеянным склерозом. // СПб, Воен.-Мед. академ., Современ. подходы к диагностике и лечению нервных и психич. заболеваний. 2000, стр. 374-375.

31. Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, С.Б.Чекнев, В.И.Скворцова. Показатели интерферонового статуса и чувствительность клеток к интерферону у больных рассеянным склерозом, получающих патогенетическую терапию. // СПб, Лики России, Рассеянный склероз: лечение и оздоровление. 2000, стр.62-63.

32. Mezentseva M.V., Ospelnikova T.P., Narovlyansky A.N., Ershov F.I. Determination of Possible Influence of IFN Preparations and IFN Inducers on Cytokines’ Production in Patients with Viral Infections. // European Cytokine Network., V.11, 2000.

33. M.V.Mezentseva, A.N.Narovlyansky, N.V.Kasyanova, M.V.Tsvetnova, M.Yu.Vershinina, O.V.Kalinchuk, V.O.Polonsky, F.I.Ershov. Sensitivity to IFN Preparatins and IFN Inducers in Patients with Different Viral Infections. // там же 34. Narovlyansky A.N., Vershinina M.Yu., Amchencova A.M., Mezentseva M.V., Parfenov V.V., Ershov F.I. The Cytokine mRNAs in Cell Lines with Different IFN-sensitivity. // 35. S.B.Cheknev, N.A.Kobyakina, M.V.Mezentseva, V.I.Skvortsova. Cell Response to Betaferon as an Indication on Prognosis in Multiple Sclerosis. // там же 36. М.В. Мезенцева, Н.В.Касьянова, Д.В.Быченко, А.Л.Коваленко, Ф.И.Ершов.

Циклоферон в терапии острого гепатита С у наркоманов. // Клиническая фармакология и терапия, 2000, №1, 89-91.

37. А.Н.Наровлянский, А.М.Амченкова, М.В. Мезенцева, Ф.И.Ершов. Клеточная чувствительность к действию интерферона при различных формах вирусной патологии. // Вопросы вирусологии, 2000, №3, 20-25.

38. А.Н.Наровлянский, А.М.Амченкова, М.В.Мезенцева, А.В.Санин, Ф.И.Ершов.

Клеточная чувствительность к действию интерферона при иммунодефицитах, аутоиммунных и аллергических заболеваниях. // Russian Journal of Immunology 2000, V.5 N.2, 185-192.

39. С.Б.Чекнев, Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, Н.С.Чекнева, В.И.Скворцова.

Динамика показателей интерферонового статуса в ходе иммунотерапии рассеянного склероза: индивидуальный анализ. // Russian Journal of Immunology, 2000, V.5, N.4, стр. 399-406.

40. Нурмухаметов Р.Х., Онуфриева Е.К., Солдатский Ю.Л., Мезенцева М.В., Касьянова Н.В., Цветнова М.В., Кольцов В.Д. Оценка образования антител к интерферону и их влияния на эффективность интерферонотерапии у детей, страдающих ювенильным респираторным паппиломатозом. // Вестник оториноларингологии, 2000, №4, 4 стр 41. С.Б.Чекнев, М.В. Мезенцева, А.Н.Наровлянский, Н.А.Кобякина, Ф.И.Ершов.

Выявление корреляции при действии лекарственных форм интерферона и его индукторов на клетки крови больных рассеянным склерозом in vitro. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2001, т.131, №4, 453-456.

42. С.Б.Чекнев, А.Н.Наровлянский, М.В. Мезенцева, А.М.Амченкова, Н.А.Кобякина, В.И.Скворцова, Ф.И.Ершов. Расширенный интерфероновый статус при рассеянном склерозе. // Иммунология, 2001, №1, 36-39.

43. С.Б.Чекнев, М.В. Мезенцева, А.Н.Наровлянский, Н.А.Кобякина, В.И.Скворцова, Ф.И.Ершов. Праймирующее действие медицинских препаратов интерферона на клетки крови больных рассеянным склерозом in vitro. // Иммунология, 2001, №1, 44. С.Б.Чекнев, М.В. Мезенцева, Н.А.Кобякина, Ф.И.Ершов. Выработка интерферона клетками крови больных рассеянным склерозом в присутствии лекарственных форм индукторов in vitro. // Иммунология, 2001, №2, 30-33.

45. Мезенцева М.В., Наровлянский А.Н., Оспельникова Т.П., Касьянова Н.В., Цветнова М.В., Ершов Ф.И. Прогнозирование эффективности интерферонотерапии при различных формах патологии. // Иммунология, 2001, №4, 41-44.

46. Нурмухаметов Р.Х., Онуфриева Е.К., Солдатский Ю.Л., Бродский М.Ю., Кольцов В.Д. Влияние типов вируса папиломы человека и нейтрализующих антител к 2интерферону на эффективность интерферонотерапии у детей, страдающих ювенильным респираторным паппиломатозом. // Материалы 16 Съезда оторинголарингологов России, март 2001, 6 стр 47. А.К.Токмалаев, В.В.Макашова, Л.Е.Павлова, В.В.Малиновская, М.А.Рязанцева, В.Н.Солнцева, М.В.Мезенцева, Л.В.Серебровская, Р.Ф.Максимова. Состояние систем интерферона и иммунитета у больных ХВГС. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 2001, стр.273.

48. В.В.Макашова, А.К.Токмалаев, Л.Е.Павлова, В.В.Малиновская, М.А.Рязанцева, В.Н.Солнцева, М.В.Мезенцева, Л.В.Серебровская, Р.Ф.Максимова. Система иммунитета на фоне интерферонотерапии у больных ХВГС. // там же, стр. 235.

49. В.О.Полонский, М.В.Мезенцева, Т.П.Оспельникова, А.Н.Наровлянский, В.Э.Щербенко, В.В.Семернина, Е.Ю.Анохина Ф.И.Ершов. Особенности продукции цитокинов у волонтеров в осенне-зимний период. // Аллергол. и иммунол. т.2 № 2001, стр.18.

50. М.В.Мезенцева, А.Н.Наровлянский, Т.П.Оспельникова, В.Э.Щербенко, М.Ю.Вершинина, Ф.И.Ершов. Продукция цитокинов клетками крови при вирусных инфекциях и других формах патологии. // Медицинская иммунол. т.3, №2, 2001, стр.228-229.

51. М.Ю.Вершинина, А.Н.Наровлянский, А.М.Амченкова, Ф.И.Ершов. Цитокиновые мРНК влияют на чувствительность клеток к альфа-интерферону. // там же, стр. 308.

52. А.Н.Наровлянский, В.Э.Щербенко, Ф.И.Ершов. Исследование эффективности действия иммуномодуляторов, интерферонов и других цитокинов на различные культивируемые клетки. // Цитология т.43 №9 2001, стр.878.

53. Kasyanova N.V., Mezentseva M.V., Narovlyansky A.N., Sherbenko V.E., Ryazantseva M.A., Ershov F.I. Optimization of Treatment of HCV Patients with IFN Preparations. // Jornal of Interferon & Cytokine Research V.21, 54. Mezentseva M.V., Ospelnicova T.P., Narovlyansky A.N., Sherbenko V.E., Semernina V.V., Anokhina E.Yu., Ershov F.I. Cytokine Production in Healthy Volunteers. // там же 55. M.V.Mezentseva, A.N.Narovlyansky, V.E.Sherbenko, F.I.Ershov. Cytokine Production by Volunteer Cells in the Influenza Pre-epidemic Period. // там же.

56. S.B.Cheknev, N.A.Kobyakina, N.S.Chekneva, V.I.Skvortsova, M.V.Mezentseva.

Combination of Human rIFN- and rIFN- in Therapy of Multiple Sclerosis. // там же, 57. A.N.Narovlansky, M.Yu.Vershinina, M.V.Mezentseva, A.A.Sarimsakov, A.M.Amchenkova, T.Kurits, F.I.Ershov. The cytokine-inducing activity of IFN inducers.

58. Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, А.Н.Наровлянский, С.Б.Чекнев, Н.С.Чекнева, В.И.Скворцова. Интерфероновый статус и праймирующий эффект препаратов интерферона у больных рассеянным склерозом в условиях патогенетической иммунотерапии. // VII Всероссийский съезд неврологов, 2001, стр.75.

59. С.Б.Чекнев, Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, В.И.Скворцова. Пролонгированное исследование состояния системы интерферона у больных рассеянным склерозом, получающих индивидуальную иммунотерапию человеческим рекомбинантным ИФН-. // Russian Journal of Immunology V.6, N.1, 2001, стр. 39-46.

60. С.Б.Чекнев, Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, Н.С.Чекнева, В.И.Скворцова.

Возможности комбинирования человеческих рИФН- и рИФН- в комплексной иммунотерапии рассеянного склероза. // Russian Journal of Immunology V.6, N.3, 2001, стр. 271-280.

61. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В., Васильев А.Н., Щербенко В.Э., Наровлянский А.Н.

Методические указания по определению индивидуальной чувствительности организма к интерферонам, другим цитокинам и индукторам интерферона. // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств, 2002, № 1 (9), стр. 22-26.

62. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В., Васильев А.Н., Щербенко В.Э., Наровлянский А.Н.

Методические указания по проведению доклинических исследований цитокининдуцирующей активности антивирусных препаратов // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств, 2002, № (9), стр. 26-29.

63. Наровлянский А.Н., Дерябин П.Г., Вершинина М.Ю., Мезенцева М.В., Ф.И.Ершов.

Влияние индукторов интерферона на инфекцию, вызванную вирусом гепатита С, и активность мРНК цитокинов в культурах клеток SW-13 и МТ-4. // Вопросы вирусологии, 2002, № 6, стр. 17-21.

64. Mezentseva M.V., Narovlyansky A.N., Scherbenko V.E., Polonsky V.O., Anokhina E.Yu., Ershov F.I. Analysis of the interferon status and cytokine profile in patients with genital herpes. // Russian Journal of Immunology, 2002, v. 7, n. 2, p.167-174.

65. Наровлянский А.Н., Вершинина М.Ю., Амченкова А.М., Мезенцева М.В., Ершов Ф.И. Роль циокиновых мРНК в чувствительности клеток к альфа-интерферону. // Доклады Академии наук, 2002, т.383, № 5, с. 691-693.

66. Мезенцева М.В., Наровлянский А.Н., Оспельникова Т.П., Ершов Ф.И. Продукция цитокинов клетками крови при герпесе, гепатите С и других формах патологии. // Вопр. вирусол. 2002, т.47, №1, стр. 44- 67. С.Б.Чекнев, М.В.Мезенцева, Ф.И.Ершов. Ответ клеток крови на действие индукторов интерферона в прогнозе эффективности комплексной терапии рассеянного склероза. // Иммунология, 2002, т.23, №5, стр. 293-296.

68. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В., Наровлянский А.Н., Щербенко В.Э. Способ определения чувствительности живого организма к цитокину. Патент РФ на изобретение №2181889 от 27.04.2002.

69. Н.А.Кобякина, Н.С.Чекнева, М.В.Мезенцева, С.Б.Чекнев, В.И.Скворцова. Клиникоиммунологические сопоставления в оценке функционирования системы интерферона у больных рассеянным склерозом. // Неврология и психиатрия, 2002, № 11, стр. 38-42.

70. С.Б.Чекнев, М.В.Мезенцева, Н.А.Кобякина. Индукция и прайминг выработки интерферона в группах больных рассеянным склерозом, различающихся по клиническим характеристикам патологического процесса. // Иммунология, № 2, 2002, стр. 115-118.

71. С.Б.Чекнев, М.В.Мезенцева, А.Н.Наровлянский. Чувствительность клеток крови к экзогенному интерферону в прогнозе эффективности комплексной терапии рассеянного склероза. // Иммунология, № 3, 2002, стр. 186-189.

72. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В., Наровлянский А.Н., Щербенко В.Э. Способ определения чувствительности живого организма и/или его клеток к воздействию вещества, поля или комбинации веществ и/или полей. Патент РФ на изобретение №2202363 от 20.04.2003.

73. Наровлянский А.Н., Вершинина М.Ю., Дерябин П.Г., Мезенцева М.В., Ершов Ф.И.

Влияние тетрациклина на инфекционные свойства вируса гепатита С и активность мРНК цитокинов в инфицированных культурах клеток SW-13 и МТ-4. // Вопросы вирусологии, 2003, № 1, стр.35-38.

74. Мезенцева М.В., Щербенко В.Э., Наровлянский А.Н., Фарфаровский М.С., Павлов В.И., Павлова С.В., Ершов Ф.И. Особенности продукции интерферонов и цитокинов при генитальном герпесе. // Вопр. вирусол. 2003, т.48, №6, стр. 33-37.

75. Мезенцева М.В., Ломакина Е.А., Наровлянский А.Н., Щербенко В.Э., Семернина В.В., Павлова С.В., Кулагин В.И., Ершов Ф.И. Оценка системы интерферона у больных с серорезистентностью после лечения сифилиса. // Иммунология. 2003, №2, стр. 82-86.

76. Полонский В.О., Оспельникова Т.П., Тутушкина Т.В., Мезенцева М.В. Индуктор интерферона Кагоцел. Результаты клинических исследований. // Научные труды ГИУВ МО РФ, М., 2003, стр.162-164.

77. Бавашева Е.В., Турьянов М.Х., Ватагина О.Н., Семернина В.В., Павлов В.И., Мезенцева М.В. Особенности синтеза цитокинов при хроническом вирусном гепатите С. // Материалы VI Рос. Съезда врачей-инфекционистов, СПб., 2003, стр.22.

78. Mezentseva M.V., Sanin A.V., Scherbenko V.E., Vatagina O.N., Darevskaya A.N., Bavasheva E.V., Turyanov M.H., Narovlyansky A.N. The pattern of cytokine synthesis in patients with chronic viral C hepatitis. // Jornal of Interferon & Cytokine Research V.23, 2003, p.133.

79. Ф.И.Ершов, А.Н.Наровлянский, М.В.Мезенцева. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях. // Цитокины и воспаление, 2004, т.3, №1, стр.3-6.

80. Спицина Е.Г., Перламутров Ю.Н., Мезенцева М.В. Особенности иммунного статуса у больных с серорезистентностью после лечения сифилиса. // Материалы научно-практической конференции «Хронические дерматозы: новые аспекты патогенеза и терапии. Инфекции, передаваемые половым путем», М., 2004, стр.55.

81. Ф.И.Ершов, А.Н.Наровлянский, П.Г.Дерябин, Л.К.Березина, Т.А.Гуськова, И.С.Николаева, М.В.Мезенцева, С.С.Григорян, С.В.Ожерелков, А.Н.Васильев, В.Э.Щербенко, И.А.Ленева. Методические указания по изучению специфической противовирусной активности фармакологических веществ. // в кн. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению фармакологических веществ.

(под редакцией Р.У.Хабриева), М., 2005, стр. 532-557.

82. Ф.И.Ершов, Э.Б.Тазулахова, А.Н.Наровлянский, С.С.Григорян, М.В.Мезенцева, В.Э.Щербенко. Методические указания по изучению специфической активности индукторов интерферона. // там же, стр. 558-571.

83. Н.Ф.Мясоедов, Ф.И.Ершов, О.Н.Учакина, П.Н.Учакин, М.В.Мезенцева, А.А.Зозуля, И.М.Сургучева, О.Ю.Соколов. Изучение цитокинмодулирующих и антивирусных свойств биологически активных пептидов – гипролинов. // Тезисы докладов «Фундаментальные науке – медицине», М., 2005, стр. 175-177.

84. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В. Новые подходы к разработке препаратов, регулирующих иммунный ответ при инфекционной патологии. // Международный Междисциплинарный Семинар «Новые технологии в интегративной медицине и биологии. Стресс и экстремальные состояния», Бангкок, 2006, стр. 32-33.

85. Павлова С.В., Мезенцева М.В., Щербенко В.Э., Ершов Ф.И. Индивидуализация терапии при цитомегаловирусной инфекции и генитальном герпесе на основании изучения состояния системы интерферона и цитокинов больных. // там же, стр.55.

86. Чернакова Г.М., Мезенцева М.В., Абаева М.Р., Щербенко В.Э., Сургучева И.М., Ершов Ф.И. Иммунитет при хронической инфекции переднего сегмента глаза. // Выражаю глубокую признательность за постоянные ценные консультации и помощь при оформлении диссертации академику РАМН, доктору медицинских наук, профессору Феликсу Ивановичу Ершову.

Искренне признательна за содействие в проведении исследований по теме диссертации и всестороннюю помощь доктору биологических наук, профессору Александру Наумовичу Наровлянскому.

Благодарю за активную помощь в работе и анализе полученных результатов сотрудников отдела интерферонов и отдела иммунологии НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН, принимавших участие в исследованиях, результатом которых явилась данная работа.

Отдельная благодарность всем клиницистам за предоставленную возможность для исследований и оценку клинического состояния обследованных больных.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВБН — вирус болезни Ньюкасла ВГС – вирусный гепатит С ВГВ - вирусный гепатит В ВПГ-2 - вирус простого герпеса 2 типа ВЭМК — вирус энцефаломиокардита мышей ЕКК — естественные киллерные клетки ИППП – инфекции передающиеся половым путем ИЛ — интерлейкин ИФА — иммуноферментный анализ ИФН— интерферон рИФН — рекомбинантный интерферон ИФН статус — интерфероновый статус ИФН- — альфа-интерферон ИФН- — бета-интерферон ИФН- — гамма-интерферон КонА –конканвалин А МЕ — международные единицы МПК – мононуклеары переферической крови ОВГВ – острый вирусный гепатит В ОВГС - острый вирусный гепатит С ОТ – обратная транскрипция ПЦР — полимеразная цепная реакция РМЖ – рак молочной железы РНК — рибонуклеиновая кислота мРНК — матричная РНК РС - рассеянный склероз РЦР – ранние цитокиновые реакции СР - серорезистентность СЭА – стафилококковый энтеротоксин А ТЦД50 — 50% тканевая цитопатогенная доза ФГА – фитагемагглютенин ФНО – фактор некроза опухолей ХВГВ - хронический вирусный гепатит В ХВГС – хронический вирусный гепатит С CD3 – Т-лимфоциты CD4 – Т-хелперы CD8 – Т-супрессоры Ig – иммуноглобулин IgG – иммуноглобулин класса G IgM - иммуноглобулин класса М IgA - иммуноглобулин класса А Th – Т-хелперы Th1 – Т-хелперы 1-типа Th2 – Т-хелперы 2-типа

Похожие работы:

«ВАРКЕНТИН Андрей Владимирович ПОСТВАКЦИНАЛЬНЫЙ ИММУНИТЕТ К ГРИППУ У РАЗНЫХ ВИДОВ ДОМАШНИХ ПТИЦ 06.02.02 Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир – 2011 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Федеральный центр охраны здоровья животных (ФГБУ ВНИИЗЖ), г. Владимир Научный руководитель – доктор...»

«УДК 591.15.152:597.553.2(571.66) Маркевич Григорий Николаевич Интродукция жилой формы нерки Oncorhynchus nerka (Walb.) в безрыбные водоемы Камчатки 03.00.10 – ихтиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидат биологических наук Москва – 2008 2 Работа выполнена на кафедре ихтиологии биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова...»

«Пименова Анна Евгеньевна УПРАВЛЕНИЕ МАРКЕТИНГОВЫМИ КОММУНИКАЦИЯМИ ПРЕДПРИЯТИЙ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ЭКСТРЕМАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ 08.00.05 – Экономика и управление народным хозяйством: 3. Маркетинг АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата экономических наук Волгоград – 2008 Работа выполнена на кафедре менеджмента и маркетинга Вятского государственного университета Научный руководитель доктор экономических наук, профессор Скопина Ирина Васильевна....»

«Гарбацевич Владимир Алексеевич ИССЛЕДОВАНИЕ ИЗЛУЧАТЕЛЕЙ И СИГНАЛОВ ИОНОЗОНДА И ГЕОРАДАРА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГЕОФИЗИЧЕСКИХ СРЕД 01.04.03 – радиофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Троицк - 2008 2 Работа выполнена в Учреждении Российской Академии наук Институт земного магнетизма, ионосферы и распространения радиоволн им. Н.В. Пушкова РАН Научный руководитель : доктор физико-математических наук Козлов Александр Николаевич...»

«Липатов Александр Николаевич Методы, приборы и результаты исследования метеорологических параметров атмосферы Венеры и Марса Специальность 01.04.01 -Приборы и методы экспериментальной физики АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физикоматематических наук Москва 2008 Работа выполнена в отделе Физики планет и малых тел Солнечной системы Института космических исследований РАН Научный руководитель : доктор физ.-мат. наук Линкин Вячеслав Михайлович (ИКИ...»

«Имшенник Екатерина Владимировна КАРТОГРАФИЧЕСКОЕ ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ 137Cs НАИБОЛЕЕ ПОСТРАДАВШИХ В РЕЗУЛЬТАТЕ АВАРИИ НА ЧАЭС РЕГИОНОВ РОССИИ Специальность 25.00.36 – Геоэкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Москва – 2011 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении Институт глобального климата и экологии Федеральной службы по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды и Российской...»

«Долгих Андрей Владимирович ФОРМИРОВАНИЕ ПЕДОЛИТОСЕДИМЕНТОВ И ПОЧВЕННО-ГЕОХИМИЧЕСКОЙ СРЕДЫ ДРЕВНИХ ГОРОДОВ ЕВРОПЕЙСКОЙ РОССИИ 25.00.23 – физическая география и биогеография, география почв и геохимия ландшафтов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Москва – 2010 Работа выполнена в Лаборатории географии и эволюции почв Института географии Российской академии наук Научный руководитель : доктор географических наук Александровский...»

«Мамзин Евгений Анатольевич Высокопроизводительные клеточные автоматы с реконфигурируемым шаблоном и их применение для моделирования неоднородных динамических систем 05.13.18 – математическое моделирование, численные методы и комплексы программ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Тольятти – 2011 Работа выполнена в Тольяттинском государственном университете Научный руководитель : доктор технических наук, доцент, Лиманова...»

«ПЛУТНИЦКИЙ АНДРЕЙ НИКОЛАЕВИЧ НАУЧНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРИОРИТЕТНЫХ НАПРАВЛЕНИЙ РАЗВИТИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ТЕРРИТОРИИ 14.02.03. - общественное здоровье и здравоохранение Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва – 2014 Работа выполнена в ФГБУ Национальный НИИ общественного здоровья РАМН Научный консультант : Линденбратен Александр Леонидович доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ Зам....»

«УШАКОВ Александр Александрович САМОУРАВНОВЕШЕННЫЕ ПОЛЯ НАПРЯЖЕНИЙ 01.02.04 - механика деформируемого твердого тела Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Владивосток - 2006 Работа выполнена в Дальневосточном государственном техническом университете Научный руководитель : член-корреспондент РАН, доктор физико-математических наук, профессор Гузев Михаил Александрович. Официальные оппоненты : доктор физико-математических наук,...»

«Леонтович Марфа Кирилловна Terebellidae (Polychaeta) умеренных и холодных вод Евразии. Таксономия и биогеография 03.02.08 – экология (биология) и 03.02.10 – гидробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2011 2 Работа выполнена на кафедре гидробиологии Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова Научные руководители: доктор...»

«Железов Роман Владимирович РАЗРАБОТКА И ИССЛЕДОВАНИЕ ИНФОРМАЦИОННОСПРАВОЧНОЙ СИСТЕМЫ ПОИСКА ОПТИМАЛЬНЫХ ПУТЕЙ ПРОЕЗДА НА ПАССАЖИРСКОМ ТРАНСПОРТЕ Специальность 05.12.13 – Системы, сети и устройства телекоммуникаций. АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва – 2009 Работа выполнена на кафедре телекоммуникационных сетей и систем в Московском физико-техническом институте (государственном университете). Научный руководитель : доктор...»

«Макаренко Наталья Викторовна ФТОРОКОМПЛЕКСНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ СУРЬМЫ(III) С КИСЛОРОД- и АЗОТСОДЕРЖАЩИМИ ОРГАНИЧЕСКИМИ ЛИГАНДАМИ: СИНТЕЗ, СОСТАВ, СТРОЕНИЕ, СВОЙСТВА 02.00.01 – неорганическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Владивосток – 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте химии ДВО РАН (ИХ ДВО РАН). Научный руководитель доктор химических наук, профессор Земнухова Людмила Алексеевна Официальные...»

«КРИВОЛУЦКАЯ Надежда Александровна ЭВОЛЮЦИЯ ТРАППОВОГО МАГМАТИЗМА И Pt-Cu-Ni РУДООБРАЗОВАНИЕ В НОРИЛЬСКОМ РАЙОНЕ Специальность 25.00.11 - геология, поиски и разведка твердых полезных ископаемых; минерагения Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора геолого-минералогических наук Москва – 2012 г. 1 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Ордена Ленина и Ордена Октябрьской революции Институте геохимии и аналитической химии им. В.И. Вернадского РАН...»

«Петросян Лилит Грантовна ОЦЕНКА НЕЙРОПРОТЕКТИВНЫХ СВОЙСТВ КСЕНОНА ПРИ ОПЕРАЦИЯХ У БОЛЬНЫХ С ОБЪЕМНЫМИ ОБРАЗОВАНИЯМИ ГОЛОВНОГО МОЗГА 14.01.20 - анестезиология и реаниматология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва- 2014 г. 1 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского Российской академии медицинских наук, отделении анестезиологииреанимации...»

«УДК 519.95 КАЛИНИН Олег Михайлович МАТЕМАТИЧЕСКАЯ БИОЛОГИЯ И КВАНТОВАНИЕ. ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОД, НЕРВНЫЙ ИМПУЛЬС, ГЛОБАЛЬНАЯ ЭКОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА 01.01.09 Дискретная математика и математическая кибернетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора физико-математических наук Санкт-Петербург 2005 Работа выполнена на кафедре Теории управления факультета Прикладной математики–процессов управления Санкт-Петербургского...»

«Чжан Цзе ГИПЕРГЕННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ИНЖЕНЕРНО-ГЕОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МОРЕННЫХ СУГЛИНКОВ МОСКОВСКОГО РЕГИОНА И ЛАТЕРИТОВ ЮЖНОГО КИТАЯ Специальность 25.00.08 – инженерная геология, мерзлотоведение и грунтоведение АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата геолого-минералогических наук Москва – 2010 Работа выполнена на кафедре инженерной геологии Российского государственного геологоразведочного университета им. С. Орджоникидзе Научный руководитель : доктор...»

«ИВАНКОВ ДМИТРИЙ НИКОЛАЕВИЧ ТЕОРИЯ СКОРОСТЕЙ СВОРАЧИВАНИЯ ГЛОБУЛЯРНЫХ БЕЛКОВ 03.00.02. – биофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва 2006 1 Работа выполнена в Институте белка РАН Научные руководители: доктор физико-математических наук, профессор Финкельштейн Алексей Витальевич Официальные оппоненты : доктор физико-математических наук Потехин Сергей Александрович доктор физико-математических наук,...»

«БУЯНКИН ПАВЕЛ ВЛАДИМИРОВИЧ ОЦЕНКА УСТОЙЧИВОСТИ ПЛАТФОРМ И НАГРУЗОК В ОПОРНО-ПОВОРОТНЫХ УСТРОЙСТВАХ ЭКСКАВАТОРОВ-МЕХЛОПАТ Специальность 05.05.06 – Горные машины Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Кемерово - 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Кузбасский государственный технический университет имени Т. Ф. Горбачева. Научный руководитель - доктор...»

«Кравцова Татьяна Робертовна ОКСИГЕННЫЕ ФОТОТРОФНЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ, АССОЦИИРОВАННЫЕ С ГИДРОИДОМ DYNAMENA PUMILA Специальность 03. 02. 10. – гидробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2013 Работа выполнена на кафедрах биоинженерии и гидробиологии биологического факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Московский государственный университет...»








 
2014 www.av.disus.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.