WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

ВАРКЕНТИН Андрей Владимирович

ПОСТВАКЦИНАЛЬНЫЙ ИММУНИТЕТ К ГРИППУ У РАЗНЫХ ВИДОВ

ДОМАШНИХ ПТИЦ

06.02.02 «Ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Владимир – 2011 2

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных»

(ФГБУ «ВНИИЗЖ»), г. Владимир

Научный руководитель – доктор ветеринарных наук Ирза Виктор Николаевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Мищенко Владимир Александрович ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», ФГБУ «ВНИИЗЖ»

г. Владимир доктор ветеринарных наук, профессор Кушнир Анатолий Тимофеевич Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии), г. Покров ФГБУ «Всероссийский государственный

Ведущая организация – Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» ФГБУ «ВГНКИ», г. Москва

Защита диссертации состоится «04» октября 2011 г. в 1000 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 220.015.01 при ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» по адресу: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в библиотеке и на сайте диссертационного совета Д 220.015.01 при ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»: http//www.arriah.ru.

Автореферат разослан «»20 г.

Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций, доцент А.П. Пономарёв

1.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Грипп птиц (ГП) – высококонтагиозная особо опасная зооантропонозная болезнь. Заболевание наносит большой экономический ущерб, связанный с гибелью и уничтожением птицы, затратами на проведение ветеринарносанитарных мероприятий, а также представляет опасность для человека В.А.

Бакулин, 2006.

В Российской Федерации высокопатогенный грипп птиц (ВПГП) не регистрировали с 1968г. по 2005г., и страна считалась благополучной по этому заболеванию.

Низкопатогенные вирусы неоднократно выявляли в разные годы среди дикой перелётной птицы на территории страны. В 2005г. в РФ впервые зарегистрирован грипп птиц, вызванный вирусом гриппа птиц (ВГП) H5N1Н.А. Власов, 2006.

Вакцинацию в составе комплекса мер борьбы с ВПГП применяют в некоторых странах I.Capua, 2004; Н. Chen, 2008-2009; I.H. Brown, 2007; L.D. Sims, 2007.

Обычно для этих целей используют инактивированные и/или векторные вакцины, экспрессирующие ген гемагглютинина Yu. Kangzhen, 2007; E. Spackman, 2008.

В РФ для предотвращения распространения и проникновения вируса H5N1 в птицеводческие предприятия с 2006г. применяется стратегия вакцинации домашних птиц разных видов в зонах повышенного риска, примыкающих к местам массовых скоплений диких перелетных водоплавающих птиц Н. А. Власов, 2006.

В 2005г. в ФГУ «ВНИИЗЖ» по заданию Россельхознадзора была разработана вакцина против гриппа птиц инактивированная эмульгированная из штамма ВГП H5N1.

Серийное производство препарата было организовано в ОАО «ПЗБ», и в 2006г. создан его необходимый резерв Д.С. Сурнев, 2007. Однако до выпуска первой серии вакцины грипп распространился в 8 субъектах РФ. Особенно тревожная ситуация сложилась в Южном Федеральном округе из-за проникновения вируса в промышленные предприятия, где погибло и было уничтожено более 1,5 млн. кур А.М. Смирнов, 2007.

В ФГУ «ВНИИЗЖ» были проведены испытания антигенной и иммуногенной активности вакцины на курах, и была показана высокая эффективность биопрепарата.

Однако изучение продолжительности поствакцинального иммунитета у разных видов домашних птиц на момент осуществления стратегии вакцинации не было проведено.

В ходе анализа информации о напряженности иммунитета у домашних птиц в разных регионах РФ были получены противоречивые данные, что, видимо, было связано со сложностью обеспечения качественного и статистически достоверного контроля напряженности иммунитета у привитого поголовья в личных хозяйствах граждан.

Поэтому изучение поствакцинального иммунитета к гриппу у разных видов птиц в экспериментальных условиях приобрело актуальность. Кроме того, занос в 2008г. в РФ штамма H5N1 ВГП новой генетической линии (клад 2.3.2) обусловил необходимость изучения протективных свойств вакцин в отношении этого штамма.

Цель и задачи исследований. Цель работы – изучение поствакцинального гуморального иммунитета к гриппу у разных видов домашних птиц.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

- изучить динамику поствакцинального иммунитета к гриппу птиц у кур, уток, мускусных уток и гусей в зависимости от дозы, способа инъекции и кратности вакцинации;



- определить возможность использования эритроцитов селезня в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);

- изучить трансовариальную передачу поствакцинальных антител к ВГП;

- оценить протективные свойства инактивированных вакцин в отношении разных штаммов Н5N1 ВГП и установить сроки выделения вируса во внешнюю среду при проведении контрольного заражения;

- сравнить протективный потенциал вакцин из гомологичного эпизоотическому (Н5N1) и гетерологичного (Н5N3) штаммов ВГП;

- оценить местные тканевые реакции на вакцину у разных видов домашних птиц.

Научная новизна. Впервые изучена динамика поствакцинального иммунитета к гриппу птиц после иммунизации инактивированной эмульгированной вакциной из штамма Н5N1 в зависимости от дозы, способа инъекции и кратности вакцинации у кур, уток, мускусных уток и гусей.

Определены протективные свойства инактивированных вакцин против ВГП подтипа Н5 в отношении штаммов ВГП Н5N1, принадлежащих кладам 2.2. и 2.3.2.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны «Рекомендации по вакцинации птиц против гриппа птиц», которые были одобрены Россельхознадзором и разосланы руководителям органов управления ветеринарией субъектов РФ и руководителям территориальных управлений Россельхознадзора в виде циркулярного письма № ФС-АС-2/8881.

Внесены изменения в инструкцию по применению вакцины против гриппа птиц инактивированной эмульгированной.

Одобрены ученым советом и утверждены зам. директора ФГУ «ВНИИЗЖ»

«Методические рекомендации по анализу динамики поствакцинального гуморального иммунного ответа у птиц (на примере гриппа, ИЛТ и ИБК)».

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Динамика поствакцинального иммунитета к гриппу птиц после иммунизации инактивированной эмульгированной вакциной из штамма Н5N1 в зависимости от дозы, способа инъекции и кратности вакцинации у кур, уток, мускусных уток и гусей.

2. Протективные свойства инактивированных эмульгированных вакцин против ГП подтипа Н5 в отношении штаммов ВГП Н5N1, изолированных на территории РФ.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с сотрудниками ФГУ «ВНИИЗЖ» Кулаковым В.Ю., Фроловым С.В., Чвалой И.А., Бабиным Ю.Ю., Андриясовым А.В., Циванюк М.А., Волковым М.С., Пичуевым А.Е., а так же с сотрудниками ГНУ «ВНИИСХ» Фроловой Л.В., Гришиной Д.С., за что автор выражает им искреннюю благодарность.

Апробация результатов работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на III Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (г.

Москва, 2007г.), отчетном собрании ассоциации гусеводов в ГНУ «ВНИИСХ»

Россельхозакадемии (г. Суздаль, 2007г.), на заседаниях ученого совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 2007-2010 гг.

Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано работ, в том числе 7 статей в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста, включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 38 таблицами и 23 рисунками. Список литературы включает 200 источников, из них 106 отечественных и 94 зарубежных. В приложениях представлены копии титульных листов документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Вакцины:

- вакцина против гриппа птиц инактивированная эмульгированная производства Покровского завода биопрепаратов трех серий: серия 16, контроль 16, дата изготовления 07.2006г.; серия 17, контроль 17, дата изготовления 08.2006г. и серия 21, контроль 21, дата изготовления 08.2007г;

- экспериментальные инактивированные эмульсионные вакцины из штамма ВГП H5N3, моно- и биштаммовая вакцины из штаммов ВГП H5N1, разработанные в ФГУ «ВНИИЗЖ».

Все вакцины, использованные в экспериментах, представляли собой эмульсии обратного типа («вода-масло») на основе адъюванта Монтанид ISA 70 (СЕППИК, Франция) с весовым соотношением водной и масляной фаз 30:70.

Вирус. Для контрольного заражения птиц использовали штаммы ВГП из коллекции ФГУ «ВНИИЗЖ»: А/утка/Новосибирск/02/05 Н5N1 и А/курица/Приморск/85/08 Н5N1 («Новосибирск» и «Приморск») в дозах 106 ЭИД/ 0,5 см3 внутримышечно.

Подопытные животные. В производственных условиях (ГНУ «ВНИИСХ», г.

Суздаль Владимирской обл.) было привито более 5000 гол гусей в возрасте 1-3 года следующих пород: владимирская глинистая, итальянская, китайская серая.

В лабораторных экспериментах в ФГУ «ВНИИЗЖ» было вакцинировано более 450 гол птиц разного возраста (5 сут-5 мес): утят кросса «Благоварский»; мускусных уток; кур кроссов «Хайсекс коричневый» и «Хайсекс-белый». Утки были доставлены из ГППЗ «Благоварский», Республика Башкортостан, куры – из ЗАО п/ф «Кинешемская» Ивановской обл. и ОАО п/ф «Ковровская» Владимирской обл.

Условия кормления и содержания птиц соответствовали зоотехническим нормам.

Растворы и реактивы: спирт этиловый 70%, фосфатно-буферный раствор (ФБР, рН 7,2-7,4), физиологический раствор (0,15 М), дихлорэтилен, цитрат натрия 3%.

Оборудование: термостат лабораторный «MIM» (СНГ), высокоскоростная центрифуга «Eppendorf» (Германия), холодильник бытовой «Бирюса» (Россия), морозильная камера (- 20°С) «Sanyo» (Корея), ламинарные шкафы «Импеданс»

(Россия), «Esco» (Сингапур) с вертикальным рециркуляционным потоком, компьютер, изолирующие боксы для содержания птиц «Изоп» (Россия), иглы инъекционные 0,8х38 и 0,6х25, шприцы однократного применения различного объема «Луер» (Россия) и «Ситек Сервис» (КНР), автоматические шприцы многоразового использования «Socorex» (EU), пипетки автоматические со сменными наконечниками различного объема «Gilson» (Франция), планшеты полимерные для иммунологических реакций, пробирки Флоринского (Россия).

Вакцинация птиц. Иммунизацию проводили внутримышечно в область груди (в/м) или подкожно в среднюю треть шеи (п/к), предварительно обработав место инъекции 70% раствором этилового спирта. В производственных условиях птиц вакцинировали с помощью автоматического шприца многоразового использования.

Отбор крови и подготовка сывороток. Пробы крови у птиц отбирали из подкрыльцовой вены, у утят – из вены голени до вакцинации и в разные сроки после нее. Подготовку проб и получение сывороток проводили по общепринятой методике Р.Н. Коровин, 1989. До исследований сыворотки сохраняли при температуре минус 20С. Всего отобрано 4500 проб крови, из них 1800 проб в производственном опыте и 2700 проб в лабораторных экспериментах.

Получение 1% суспензии эритроцитов петуха и селезня. Кровь у петуха и селезня отбирали из подкрыльцовой вены, добавляли 3% раствор цитрата натрия ( часть на 4 части крови), центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об/мин с последующим 3-кратным ресуспендированием осадка эритроцитов в физрастворе до первоначального объема. Для приготовления 1% взвеси эритроцитов из пробирки отбирали 1,0 см3 осажденных эритроцитов и добавляли 99,0 см3 физраствора, после чего использовали в РТГА Р.Н. Коровин, 1989; C. Terregino, 2009; OIE Manual, 2010.

Серологические исследования. Уровень антител к ВГП в сыворотках крови птиц определяли в РТГА с использованием антигенов (АГ) производства ФГУ «ВНИИЗЖ», ОАО «ПЗБ», Института Зоопрофилактики (Италия) в соответствии с инструкциями производителей диагностических наборов. Уровень антител выражали в средних геометрических титрах (СГТ) в логарифмах с основанием 2 (log2).

Определение трансовариальной передачи антител. От вакцинированных птиц проводили отбор яиц. Для приготовления желточного экстракта 1,5 см3 желтка смешивали с 6,0 см3 физиологического раствора. Затем в пробирки вносили 2,0 см дихлорэтилена, смесь интенсивно перемешивали встряхиванием, прогревали в течение 1 ч при температуре 37С и центрифугировали 15 мин при 2000 об/мин.

Полученную прозрачную, слегка опалесцирующую надосадочную жидкость использовали в РТГА В.А. Бакулин, 2006; J.R. Beck, 2002.

Оценка поствакцинального иммунитета. Вакцинацию считали эффективной, а поствакцинальный иммунитет напряженным, если у 80% вакцинированных птиц титр антител составлял 4,0 log2 Инструкция по применению вакцины, 2006; OIE Manual, 2010.

Оценка местных тканевых реакций на введение вакцины. Результаты наружного осмотра оценивали по появлению припухлости или образованию твердой опухоли в месте введения вакцины, послеубойную оценку степени поражения тканей проводили по критериям, предложенным H.D. Stone 1997.

Критерии учета состояния птиц после заражения вирусом ВГП.

За птицами наблюдали в течение 10 сут. Клинически здоровыми считали птиц, охотно потребляющих корм и воду, адекватно реагирующих на внешние раздражители, без каких-либо признаков заболевания. При любом отклонении от физиологической нормы (отказ от корма и воды, признаки угнетения, нарушения деятельности дыхательной, пищеварительной, нервной систем) считали птицу больной. Тяжелобольными признавали птиц с ярко выраженными признаками поражения различных систем, характерными для гриппа птиц OIE Manual, 2010.

Прогнозирование иммунного ответа с помощью математической модели.

Модель иммунной реакции представляли хронологической диаграммой в виде несимметричной трапеции, где более пологая боковая сторона соответствует фазе регрессии иммунитета (рис. 1).

Рис. 1. Модель поствакцинальной гуморальной иммунной реакции у птиц Примечание: log2 T – титры сывороточных антител соответственно времени после вакцинации (сут);

f1 – фаза развития, f2 – фаза стабилизации, f3 – фаза регрессии иммунного ответа;

L1 – допротективный период, L2 – протективный период иммунной реакции;

Пунктиром обозначен протективный титр антител – 4,0 log2.

Прогнозируемое значение титра антител (log2”T) на фазе f3 определяли с помощью уравнения по стандартному методу наименьших квадратов («Линейная регрессия» в Microsoft Excel): log2”T= [kt]+log2 T0, где log2T0 – математический оператор (параметр положения линии регрессии по оси Расчет продолжительности протективного периода в непрерывном отсчете от дня вакцинации (S)производили по формуле: S(L1+L2)= (log2T0 – log2 Tprot))/ |k|, где Статистическая обработка и графическое отображение данных. Для вычисления средней арифметической величины и ее статистической ошибки, существенности различий сопоставляемых величин использовали описанные в литературе методы Н.В. Садовский, 1975; Н.А. Плохинский, 1975; Л. Закс, 1976; Дж.

Поллард, 1982, а также пакет прикладных программ Microsoft Office Excel 2003.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Иммунитет при однократной вакцинации в различных вариантах.

Исследовали периоды развития, стабилизации и регрессии поствакцинального гуморального иммунного ответа птиц, привитых вакциной производства ОАО «ПЗБ»

в следующих вариантах: в/м в дозе 0,5 см; п/к – 0,5 см; в/м – 1,0 см; п/к – 1,0 см.

Соответственно вариантам иммунизации были образованы 4 экспериментальные и одна контрольная группы молодняка кур 63-сут возраста кросса «Хайсекс коричневый» по 10 гол каждая. Сыворотки крови птиц отбирали во всех группах до эксперимента и через заданные интервалы времени после прививки в течение 180 сут.

Титры сывороточных антител к ВГП определяли в РТГА с набором ФГУ «ВНИИЗЖ».

Результаты серологических исследований представлены в табл. 1.

Динамика титров поствакцинальных антител к ВГП у кур в зависимости Срок после Средние титры в РТГА, log2 (числитель) и напряженность иммунитета по Результаты, представленные на рис. 2, демонстрируют, что данные серологических исследований (табл. 1) практически совпадают с расчетными сроками продолжительности иммунитета, полученными с помощью регрессионного анализа.

При иммунизации птиц в/м или п/к в дозе 0,5 см3 допротективный период составлял не менее 14 сут. Период стабилизации иммунной реакции продолжался с 21 по 60 сут, СГТ антител к ВГП имел величину при в/м прививке log2Tstab = 4,97±0,16 и при п/к – log2 Tstab=4,62±0,16. Период регрессии иммунного ответа при обоих вариантах начинался с 60 сут. Уравнение регрессии титров антител имело вид log2“T = (-0,026)t + 6,430 для в/м и log2“T = (-0,023)t+5,874 для п/к вакцинации, на основании чего была определена прогнозируемая продолжительность протективного периода при непрерывном отсчете со дня вакцинации: 934,20 и 826,62 сут для в/м и п/к вариантов, соответственно. Иммунизация в дозе 1,0 см3 обусловила сокращение допротективного периода (L1 14 сут) и достоверное возрастание СГТ антител на фазе стабилизации: log2 Tstab =6,54±0,20 и log2 Tstab=7,46±0,37 для в/м и п/к вариантов, соответственно. Продолжительность протективного периода составила 1284,00 сут для варианта в/м и 1363,96 сут для варианта п/к вакцинации.

log2 T Рис. 2. Развитие, стабилизация и регрессия поствакцинального гуморального иммунного ответа у кур Значения титров сывороточных антител (log2 T) представлены в виде первичных оценок (заштрихованные фигуры) и средних величин (незаштрихованные фигуры) соответственно времени после прививки (сут), дозы и способа введения вакцины, где: а) и – 0,5 см3, в/м; b) и – 0,5 см3, п/к; с) и – 1,0 см3, в/м;

d) и – 1,0 см3, п/к. Ось абсцисс пересекает ось ординат в значении 4,0 log2, что соответствует величине протективного титра антител. Представлены уравнения и линии регрессии титров антител.

Иммунитет у кур после двукратной вакцинации в дозе 0,5 см3 в/м и п/к.

Повторную прививку птиц проводили через 90 сут, при снижении титров антител до значения 4,0 log2, с использованием вариантов 0,5 см3 в/м и 0,5 см3 п/к. Результаты серологических исследований показаны в табл. 2.

Динамика титров антител к ВГП у кур после ревакцинации в зависимости Ревакцинация птиц в обоих вариантах обусловила значительное возрастание напряженности гуморального иммунитета через 30 сут со схожей динамикой иммуногенеза. Уравнение регрессии титров антител имело вид для варианта вакцинации в/м log2“T = (-0,016)t + 9,03, а для варианта п/к – log2“T = (-0,015)t + 8,92. Используя приведенные уравнения, установили, что при непрерывном отсчете со дня вакцинации прогнозируемая продолжительность иммунного ответа птиц на протективном уровне после в/м ревакцинации составила 31418,09 сут, а после иммунизации п/к – 32820,24 сут.

2.2.2. Поствакцинальный иммунитет у мускусных уток В эксперименте мускусных уток 91-сут возраста, серонегативных к ВГП, иммунизировали вакциной производства ОАО «ПЗБ» следующими способами: в/м – 0,5 см; в/м – 1,0 см; п/к – 1,0 см.

Через 1 мес титры антител не достигли уровня 4,0 log2 и составили соответственно указанным вариантам вакцинации, 3,20±0,37 log2; 3,60±0,54 log2 и 3,60±0,65 log2. Птиц, привитых 0,5 см3 в/м, ревакцинировали 0,5 см3 в/м и 1,0 см3 в/м.

Птиц остальных групп ревакцинировали через 3 мес, убедившись, что уровень антител в ответ на 1-ю вакцинацию не возрос. При сравнении результатов установили, что продолжительность иммунитета после инъекции вакцины в объеме 1,0 см3 в/м или п/к существенных различий не имела (p0,05). Через 60 сут (или через 150 сут после начала эксперимента) отметили снижение напряженности гуморального иммунитета во всех группах (табл. 3).

Поствакцинальный иммунитет к гриппу птиц у мускусных уток в зависимости № Схема Средние титры антител в РТГА, log2 (числит.) и напряженность иммунитета по гр вакцинации группам, % (знаменат.) после ревакцинации, через мес Через 30 сут после ревакцинации наступала фаза регрессии, и для нее были определены уравнения регрессии титров антител: log2“T = (-0,033)t+7,12 для группы № 1 log2 “T = (-0,0091)t+6,18 для группы № 2, log2“T= (-0,011)t+7,29 для группы № и log2“T = (-0,012)t+7,39 для группы № 4. По приведенным уравнениям рассчитали прогнозируемую продолжительность протективных периодов, которые при непрерывном отсчете со дня вакцинации составили: 957,94, 2409,59; 29312,12 и 2839,91 сут для групп №№ 1, 2, 3, 4 соответственно.

Для 1-кратной иммунизации использовали серонегативных к ВГП утят 5-сут возраста. Иммунизацию проводили вакциной производства ОАО «ПЗБ» в дозе 0,5 см п/к. Сыворотки крови отбирали у птиц до эксперимента и через 14, 21, 28 и 35 сут.

Максимальное значение СГТ антител к ВГП – 2,14±0,28 log2 – отмечено на 14 сут. На 35 сут СГТ антител снизился до нулевых значений.

На следующем этапе работы изучали поствакцинальный иммунитет у уток после 1-, 2- и 3-кратной иммунизации в дозе 1,0 см вакциной производства ОАО «ПЗБ». Серонегативных к ВГП 35-сут утят распределили на 3 группы по 10 гол в каждой: две опытных и одну контрольную. Утят вакцинировали в/м и п/к.

Аналогично через 21 сут проводили ревакцинацию и еще через 50 сут – 3-ю иммунизацию. Сыворотки крови отбирали у птиц до эксперимента и через 14, 21 сут после 1-й вакцинации; 35, 42, 49 и 71 сут после ревакцинации и с интервалом 1 мес после 3-й вакцинации. Общая продолжительность эксперимента составила 160 сут.

1-кратная иммунизация утят обеих групп обеспечивала выработку у них антител к ВГП в титрах 4,0 log2 через 14 сут, но на 21 сут СГТ антител составил 2,50±0,54 log2 и 3,00±0,53 log2, и птицы были ревакцинированы. После 2-й иммунизации обоими способами через 14 сут отмечали подъем титров антител до максимальных значений к 35 сут: 4,80±0,33 log2 после в/м и 5,50±0,26 log2 после п/к инъекции. Однако фазы стабилизации иммунного ответа не наблюдали. Через 71 сут титры антител снизились до нулевых значений. С помощью регрессионного анализа установили, что ожидаемая продолжительность протективного периода от начала эксперимента при в/м способе составила бы 38±1,301 сут, а при п/к – 43±1,31 сут.

Через 1 мес после 3-й вакцинации титры антител достигали максимальных значений: 4,60±0,58 log2 после в/м и 4,80±0,59 log2 после п/к иммунизаций. Через log2 T Рис. 3. Динамика поствакцинального гуморального иммунного ответа у уток.

Значения титров сывороточных антител (log2 T) представлены в виде первичных оценок (заштрихованные фигуры) и средних величин (не заштрихованные фигуры) соответственно времени после прививки (Сут), дозы и способа введения вакцины, где: a) и – 1,0 см3, в/м; b) и – 1,0 см3, п/к. Ось абсцисс пересекает ось ординат в значении 4,0 log2, что соответствует величине протективного титра антител. Представлены линии регрессии титров антител.

мес СГТ антител снизились на 0,3 и 0,4 log2, соответственно, а через 3 мес СГТ антител у птиц в обеих группах был ниже протективных значений (рис. 3).

Гусей трех пород иммунизировали вакциной производства ОАО «ПЗБ». За 7 мес до эксперимента гуси были 1-кратно привиты этой вакциной, поэтому перед началом опыта определяли остаточный уровень антител к ВГП в РТГА, который составил: у гусей владимирской глинистой породы 1,60±0,29 log2; итальянской – 0,50±0,11 log2;

китайской серой – 0,30±0,05 log2. Срок наблюдения составил 690 сут.

1-ю и 2-ю вакцинации проводили в/м в дозах 0,5 см3 и 1,0 см3, и п/к в тех же дозах, с интервалом 1 мес. Интервал между 2-й и 3-й вакцинацией составил 4 мес, между 3-й и 4-й – 7 мес, между 4-й и 5-й – 1мес, между 5-й и 6-й – 9 мес.

1- и 2-кратная иммунизация гусей в дозе 0,5 см3 не обеспечила достижения защитных титров антител и группового иммунитета к ВГП в течение 4 мес наблюдения за исключением гусей породы владимирская глинистая. При 1- и 2кратной иммунизации гусей в дозе 1,0 см3 в/м и 1,0 см3 п/к СГТ антител к ВГП был выше по сравнению с вакцинацией в дозе 0,5 см3 на 0,5-2,0 log2. Однако требуемый уровень антител и групповой защиты наблюдали только у гусей владимирской глинистой породы. Перед выгоном гусей на пастбище 3-ю и последующие вакцинации проводили в дозе 1,0 см3 п/к. Данные по величине и продолжительности иммунного ответа на вакцину у гусей разных пород представлены в табл. 4. Через мес после 3-й вакцинации титры антител у гусей превышали 4,0 log2, и групповой иммунитет формировался на уровне около 80% и более у поголовья всех пород.

Поствакцинальный иммунитет у гусей разных пород, привитых инактивированной вакциной против гриппа птиц из штамма Н5N Кратность Срок отбора Средние титры антител в РТГА, log2 (числитель), и напряженность вакцинации сывороток иммунитета у гусей трех пород по группам, % (знаменатель) Через 7 мес СГТ антител и показатель группового иммунитета во всех группах птиц были ниже протективных значений. После 4-й и 5-й вакцинаций титры антител через 1 мес вновь возрастали до 5,00-7,50 log2. Наиболее высокие титры – 7,50±0, log2 и напряженность группового иммунитета 96% – отмечены у гусей владимирской глинистой породы. Через 4 мес после 5-й вакцинации СГТ антител сохранялся на защитном уровне – 4,60 log2 – только у гусей этой породы, при этом групповой иммунитет составил 72%. Через 1 мес после 6-й иммунизации СГТ антител выше протективных значений регистрировали у гусей владимирской глинистой и итальянской пород, а у птиц китайской серой породы СГТ антител составил 2,90 log при 40%-ной групповой защите.

В/м и п/к варианты прививки индуцировали статистически тождественный уровень иммунной реакции, который у гусей в большей степени зависел от дозы введенного антигена. Общая прогнозируемая продолжительность протективного периода от 1-й прививки при 2-кратной вакцинации в дозе 1,0 см3 п/к у гусей разных пород составила: владимирская глинистая – 189±4,90 сут, итальянская – 77±4,85 сут, китайская серая – 94±3,64 сут, а при 3-кратной вакцинации в дозе 1,0 см3 п/к – 328±6,48 сут, 270±6,25 сут, 200±5,32 сут, соответственно.

2.2.5. Сравнение результатов РТГА с эритроцитами петуха и селезня В связи с тем, что при оценке поствакцинального иммунитета у водоплавающих птиц титры антител к ВГП были существенно ниже, чем у кур, в РТГА использовали для сравнения две гемсистемы: эритроциты петуха и селезня.

Титры антител к ВГП Н5 в сыворотках крови водоплавающих птиц в обеих гемсистемах отличались незначительно, в то время как результаты РТГА с отрицательными, а с эритроцитами петуха – положительными.

2.2.6. Изучение трансовариальной передачи антител к вирусу гриппа птиц От вакцинированных птиц каждого вида отбирали сыворотки крови и яйца по 10-15 шт. Результаты РТГА представлены в табл. 5. Таблица Результаты исследования сывороток крови и желтков яиц от привитых птиц в Титры антител к ВГП в суспензиях желтков примерно соответствовали таковым в сыворотках крови несушек, за исключением гусей двух пород, в яйцах которых антител не обнаружили.

2.2.7. Изучение устойчивости кур и уток, привитых разными вакцинами, к заражению высоковирулентными ВГП Н5N Протективные свойства вакцин изучали в несколько этапов. На первом этапе сравнивали иммунобиологические свойства вакцин из эпизоотического штамма Н5N (ОАО «ПЗБ») и из низкопатогенного штамма Н5N3 (ФГУ «ВНИИЗЖ»).

Кур 132-сут и утят 10-сут возраста прививали п/к в дозе 0,5 см3. Напряженный поствакцинальный иммунитет у кур после применения вакцины Н5N1 сформировался на 30 сут, а после вакцины Н5N3 – на 21 сут. У утят титры антител не достигли протективного уровня. У птиц контрольных групп антител к ВГП не обнаруживали.

При тестировании сывороток в РТГА с использованием трех диагностических антигенов были получены воспроизводимые и сопоставимые результаты (табл. 6).

Формирование иммунного ответа на вакцины из штаммов Н5N1 и Н5N3 у Виды Исследование Средний титр антител в РТГА, log2, с антигенами При проведении через 30 сут после вакцинации контрольного заражения было А/утка/Новосибирск/02/05 обладает более высокой патогенностью для кур и вызывает сверхострое течение болезни и гибель 60-80% привитых птиц, хотя обе вакцины обеспечили устойчивость кур к заражению вирусом «Новосибирск» (табл. 7).

ВГП «Приморск» также вызвал сверхострую форму болезни у неиммунных утят.

В то же время, обе вакцины обеспечили защиту утят от гибели после заражения обоими штаммами, при этом титры антител на момент заражения были 4,0 log2.

На следующем этапе изучали иммунобиологические свойства разработанных в ФГУ «ВНИИЗЖ» экспериментальных вакцин с антигенами из эпизоотических штаммов ВГП Н5N1 «Приморск», «Новосибирск» и из обоих вирусов (биштаммовая).

Гемагглютинирующая активность антигенов в каждой из вакцин составляла 9,0 log2.

На 14, 21, 28, 45, 60, 90 и 110 сут после иммунизации в дозе 0,5 см3 в/м испытуемыми образцами вакцин у цыплят и утят отбирали пробы крови.

Динамика титров антител к ВГП у кур в РТГА с гомо- и гетерологичными диагностическими антигенами представлена на рис. 4-5. Тесты с АГ Н5N «Новосибирск» показали, что вакцина, изготовленная на основе АГ «Новосибирск», и биштаммовая, обеспечили через 21 сут после иммунизации формирование антител на уровне 4,0 log2, который затем оставался высоким (5,0 log2) на протяжении 110 сут.

Прирост титров антител наблюдали и у цыплят, привитых вакциной из АГ «Приморск», однако до 60 сут они не достигли протективного уровня.

При исследовании сывороток крови кур в РТГА с АГ «Приморск» иммунный ответ на введение вакцин из АГ «Приморск» и биштаммовой к 21 сут достигал уровня 4,0 log2 и сохранялся выше него на протяжении 110 сут. У цыплят, привитых вакциной Н5N1 «Новосибирск», антитела в титрах 4,0 log2 выявляли на 28 сут.

ответ на введение вакцин из АГ «Приморск» и биштаммовой к 21 сут достигал уровня 4,0 log2 и сохранялся выше него на протяжении 110 сут. У цыплят, привитых вакциной Н5N1 «Новосибирск», антитела в титрах 4,0 log2 выявляли на 28 сут.

Аналогичные результаты РТГА, еще более выраженные в зависимости от соответствия вакцинного антигена диагностическому, получены при тестировании сывороток крови уток (рис. 6-7).

антигенами показали высокую активность. В РТГА с гетерологичными антигенами титры антител были ниже у цыплят на 2-3 log2, а у утят – на 4-6 log2, что свидетельствует об антигенной вариабельности штаммов ВГП внутри подтипа.

Титры антител у кур и уток, привитых биштаммовой вакциной, при исследовании в РТГА с двумя антигенами были статистически одинаковы (р>0,05).

Результаты контрольного заражения привитых кур и обнаружения вируса в Протективные свойства вакцин при заражении кур ВГП Н5N высоким протективным потенциалом в отношении штамма «Приморск».

Эксперименты с заражением продемонстрировали зависимость протективного потенциала от их соответствия штамму заражения. Применяемая в стране вакцина не обеспечивает эффективной защиты от ВГП Н5N1 клада 2.3.2.

ВЫВОДЫ

1. Выявлены видовые и породные отличия у птиц в величине и продолжительности иммунного ответа, определяемого в РТГА, и в устойчивости птиц к заболеванию и гибели при заражении высоковирулентным вирусом гриппа. У кур иммунный ответ на вакцину более выражен и продолжителен, чем у домашних водоплавающих птиц.

Куры более чувствительны к контрольному заражению. У привитых уток воспроизведение признаков болезни при экспериментальном заражении затруднительно независимо от величины титра антител. У гусей трех пород отмечена разная динамика образования и циркуляции поствакцинальных антител.

2. В экспериментальных и полевых испытаниях установлено, что после однократного применения серийно выпускаемой вакцины инактивированной эмульгированной против гриппа птиц в рекомендованной инструкцией дозе 0,5 см3 поствакцинальный иммунитет наступает у кур на 21 сут и сохраняется в течение 3 мес. У уток, мускусных уток и гусей однократная иммунизация не обеспечивает выработки антител к вирусу гриппа в титрах 4,0 log2, поэтому водоплавающих птиц необходимо прививать не менее 2 раз с увеличением дозы до 1,0 см3.

3. Установлено, что способ введения вакцины, внутримышечно или подкожно, не влияет на величину и продолжительность иммунного ответа у разных видов птиц.

Показана безвредность серийной и всех экспериментальных вакцин против гриппа птиц для кур и уток.

4. Показана возможность применения эритроцитов петуха в РТГА с сыворотками крови разных видов птиц для контроля напряженности поствакцинального иммунитета. Использование эритроцитов селезня приемлемо только для исследования сывороток крови водоплавающих птиц.

5. При изучении трансовариальной передачи антител к ВГП от вакцинированных кур, уток, мускусных уток и гусынь их потомству, установлено, что содержание антител в желтке соответствует содержанию антител в сыворотке крови.

6. Серийная вакцина инактивированная эмульгированная и экспериментальные вакцины из штаммов Н5N1 «Приморск», Н5N1 «Новосибирск», препарат на основе обоих штаммов и вакцина из низкопатогенного вируса гриппа птиц подтипа Н5N обеспечивают 100% защиту кур и уток при заражении вирусом Н5N A/утка/Новосибирск/02/05.

А/курица/Приморск/85/08/H5N1, вакцины на основе этого штамма обладают более высоким протективным потенциалом, чем вакцины на основе штамма A/утка/Новосибирск/02/05/H5N1, и обеспечивают защиту от гибели кур на 90-100%, в то время, как защита кур, привитых вакциной на основе штамма A/утка/Новосибирск/02/05/H5N1, составляет 70%. Защита уток, привитых всеми образцами вакцин, составляет 100%.

8. Показана антигенная вариабельность штаммов внутри подтипа Н5N1 ВГП.

Перекрестная активность сыворотки крови в РТГА с гетерологичным антигеном была у кур на 3,0 log2, а у уток – на 4,0 log2 ниже, чем с гомологичным.

9. Результаты обнаружения генома ВГП в клоакальных мазках с помощью ОТ-ПЦРРВ показали, что серийно выпускаемая вакцина и все экспериментальные препараты к 3 суткам после заражения обеспечивают прекращение выделения вируса привитой птицей во внешнюю среду.

10. На основе экспериментальных данных предложена математическая модель для прогнозирования динамики поствакцинального гуморального иммунного ответа, ожидаемого после однократной вакцинации фиксированной дозой антигена, и продемонстрирована тождественность расчетных периодов продолжительности иммунитета фактическим данным.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы исследований могут быть использованы для планирования противоэпизоотических мероприятий при гриппе птиц и повышения квалификации ветеринарных специалистов.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Использование эритроцитов петуха и селезня в реакции торможения гемагглютинации для оценки поствакцинального иммунитета к гриппу птиц у разных видов птиц А.В. Варкентин, В.Н. Ирза, Т.Ю. Черняева [и др.] // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2007. - Т. 5. - С. 156-161.

2. Эпизоотическая ситуация по высокопатогенному гриппу птиц в Российской Федерации / В.Н. Ирза, А.В. Борисов, А.В. Фролов [и др.] А.В. Варкентин // Проблемы совершенствования межгос. взаимодействия в подготовке к пандемии гриппа: Междунар. науч.-практ. конф. - 2008. - С. 34-36.

3. Эпизоотия среди диких и домашних птиц, вызванная высоковирулентным вирусом гриппа А/Н5N1 генотипа 2.2 (Цинхай-сибирский), на пути осенних миграций в северо-восточной части бассейна Азовского моря (Краснодарский край) / Д.К. Львов, М.Ю. Щелканов, П.Г. Дерябин [и др.] А.В. Варкентин // Вопросы вирусологии. - 2008. - № 2. - С. 14-19.

4. Расшифровка эпизоотической вспышки среди диких и домашних птиц на юге европейской части России в декабре 2007 г / Д.К. Львов, М.Ю. Щелканов, А.Г.

Прилипов [и др.] А.В. Варкентин // Вопросы вирусологии. - 2008. - № 4. - С. 18-23.

5. Поствакцинальный иммунитет к гриппу птиц у гусей / Варкентин А.В., Фролов А.В., Циванюк М.А [и др.] // Ветеринария. - 2009.- № 3. - С. 25-27.

6. Изучение поствакцинального иммунитета к гриппу у разных видов домашних птиц / А.В. Варкентин, М.А. Циванюк, В.Н. Ирза, А.В. Борисов // Ветеринария. - 2009. - № 6. - С. 25-28.

A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 / И.А. Чвала, Л.О. Щербакова, М.И. Шульпин [и др.] А.В. Варкентин // Ветеринария. - 2009. - № 10. - С. 25-26.

8. Characteristics of influenza A infection caused by A/chicken/Primorsky/85/ H5N1 virus in mallards / I.A. Chvala, L.O. Scherbakova, L.Y. Abramova [et. al.] A.V.

Varkentin//Bird Flu 2009: Avian Influenza and Human Health. - Oxford, UK, 2009. - P.

23-25.

9. Высокопатогенный грипп птиц. Текущая ситуация и меры контроля / Н.А.

Власов, В.Н. Ирза, А.В. Варкентин [и др.] // Ветеринария. - 2010. - № 1. - С. 3-7.

10. Особенности инфекции гриппа А у молодняка водоплавающих птиц, вызванной А/Chicken/Primorsky/85/08 H5N1/ И.А. Чвала, Л.Ю. Абрамова, Ю.Ю.

Бабин [и др.] А.В. Варкентин // Ветеринария. - 2010. - № 12. – С. 28-30.

––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– Подписано в печать 11.08.2011 г. Формат 60х90/16. Усл. печ. л.1. Тираж 90 экз.

ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»





Похожие работы:

«Ардельянова Яна Андреевна СОЦИАЛЬНЫЙ КОНТРОЛЬ КОРРУПЦИОННЫХ ОТНОШЕНИЙ: ТЕОРЕТИКО-МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ Специальность 22.00.01 – Теория, методология и история социологии Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата социологических наук Москва – 2013 Работа выполнена на кафедре социальной структуры и социальных процессов социологического факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования...»

«Быкова Татьяна Васильевна ЖАНРОВО-СТИЛИСТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И СТРУКТУРА ДЕЛОВЫХ ДОКУМЕНТОВ УЧРЕЖДЕНИЙ ПРОСВЕЩЕНИЯ г.ТОБОЛЬСКА ВТОРОЙ ПОЛОВИНЫ XVIII в. Специальность 10.02.01 – Русский язык АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата филологических наук Челябинск – 2012 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Тобольская государственная социально-педагогическая академия им.Д.И....»

«Терентьева Людмила Казимировна ИНОЯЗЫЧНАЯ ЛЕКСИКА И ЕЕ АДАПТАЦИЯ В ДОКУМЕНТАХ ЦЕРКОВНОГО И АДМИНИСТРАТИВНОГО ДЕЛОПРОИЗВОДСТВА XVIII В. г. ТОБОЛЬСКА Специальность 10.02.01 – Русский язык АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата филологических наук Челябинск – 2012 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Тобольская государственная социально-педагогическая академия им Д.И....»

«ДАВЫДОВА МАРИНА ВЛАДИМИРОВНА ПЕДАГОГИЧЕСКОЕ СОПРОВОЖДЕНИЕ ФОРМИРОВАНИЯ ОСНОВ ЗДОРОВОГО ОБРАЗА ЖИЗНИ РЕБЕНКА В АСПЕКТЕ ПРЕЕМСТВЕННОСТИ ДОШКОЛЬНОГО И НАЧАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ 13.00.02 – теория и методика обучения и воспитания (дошкольное образование) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Челябинск 2013 1 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Челябинский государственный педагогический университет Научный руководитель : Трубайчук Людмила...»

«ШУМЕЙКО Татьяна Степановна ФОРМИРОВАНИЕ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ КОМПЕТЕНТНОСТИ БУДУЩИХ УЧИТЕЛЕЙ ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБУЧЕНИЯ СРЕДСТВАМИ ПРОЕКТИРОВАНИЯ 13.00.08 – теория и методика профессионального образования АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Челябинск 2009 Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Челябинский государственный педагогический университет Научный руководитель :...»

«Тормашев Дмитрий Сергеевич ОЦЕНКА ТЕХНИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ И ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ НАДЕЖНОСТИ НАСОСОВ СИСТЕМ СУДОВЫХ ДИЗЕЛЕЙ Специальность: 05.08.05 – Судовые энергетические установки и их элементы (главные и вспомогательные) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Новороссийск – 2012 Работа выполнена в ФГОУ ВПО Морская государственная академия имени адмирала Ф.Ф. Ушакова Научный руководитель : доктор технических наук, профессор,...»

«УЛУМБЕКОВА Гузель Эрнстовна НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ СТРАТЕГИИ РАЗВИТИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ДО 2020 ГОДА 14.02.03 Общественное здоровье и здравоохранение Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2011 2 Работа выполнена в ФГУ Центральный научно-исследовательский институт организации и информатизации здравоохранения Росздрава (ЦНИИОИЗ Росздрава) Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН...»

«Тертерян Ашот Владимирович ОЦЕНКА СТОКОРЕГУЛИРУЮЩЕЙ И ПОЧВОЗАЩИТНОЙ СПОСОБНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ ЛЕСОВ СЕВЕРО-ЗАПАДНОГО КАВКАЗА Специальность: 06.01.02 – Мелиорация, рекультивация и охрана земель АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени кандидата сельскохозяйственных наук Новочеркасск - 2013 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Новочеркасская государственная мелиоративная академия...»

«ТОРОХОВА Галина Николаевна АКТИВИЗАЦИЯ ПОЗНАВАТЕЛЬНОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ДЕТЕЙ СТАРШЕГО ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА В ПРОЦЕССЕ ФОРМИРОВАНИЯ ЭЛЕМЕНТАРНЫХ МАТЕМАТИЧЕСКИХ ПРЕДСТАВЛЕНИЙ 13.00.02 – теория и методика обучения и воспитания (дошкольное образование) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Челябинск – 2012 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Тобольская государственная социальнопедагогическая академия им. Д.И.Менделеева Научный руководитель :...»

«Туфанов Игорь Евгеньевич МЕТОДЫ РЕШЕНИЯ ОБЗОРНО-ПОИСКОВЫХ ЗАДАЧ С ПРИМЕНЕНИЕМ ГРУПП АВТОНОМНЫХ НЕОБИТАЕМЫХ ПОДВОДНЫХ АППАРАТОВ 05.13.18 – Математическое моделирование, численные методы и комплексы программ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Владивосток – 2014 Работа выполнена в научно-образовательном центре Подводная робототехника Института проблем морских технологий ДВО РАН и Дальневосточного федерального университета. Научный...»

«НГУЕН ВИНЬ ТИЕН КИНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕНОСА ЭЛЕКТРОНОВ В СИСТЕМЕ СУБСТРАТ – БИОКАТАЛИЗАТОР – МЕДИАТОР – ЭЛЕКТРОД В БИОТОПЛИВНОМ ЭЛЕМЕНТЕ НА ОСНОВЕ GLUCONOBACTER OXYDANS 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва – 2013 Работа выполнена кафедре химии естественно-научного факультета Тульского государственного университета. Научный руководитель : кандидат химических наук, доцент,...»

«ШУПЛЕЦОВА Юлия Александровна ФРАЗЕОЛОГИЧЕСКИЕ ЕДИНИЦЫ В ПЕСЕННОМ ФОЛЬКЛОРЕ КУРГАНСКОЙ ОБЛАСТИ: СТРУКТУРНО-СЕМАНТИЧЕСКИЙ И ЛИНГВОКУЛЬТУРОЛОГИЧЕСКИЙ АСПЕКТЫ Специальность 10.02.01 – Русский язык АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата филологических наук Челябинск – 2008 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Челябинский государственный педагогический университет Научный руководитель : доктор...»

«Зиновьева Альбина Валерьевна Состояние системы свертывания крови при хроническом описторхозе в условиях эндогенной и экзогенной тромбинемии 03.03.01 - Физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Челябинск – 2012 2 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ханты-Мансийского автономного округа – Югры Ханты-Мансийская государственная медицинская академия Научный руководитель...»

«УСЕНЮК Светлана Геннадьевна ДИЗАЙН ДЛЯ УСЛОВИЙ СЕВЕРА: ПРИНЦИП СОТВОРЧЕСТВА В ПРОЕКТИРОВАНИИ ТРАНСПОРТНЫХ СРЕДСТВ Специальность 17.00.06 – Техническая эстетика и дизайн Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата искусствоведения Екатеринбург 2011 Работа выполнена на кафедре Индустриальный дизайн ГОУ ВПО Уральская государственная архитектурно-художественная академия Научный руководитель : кандидат искусствоведения, профессор Гарин Николай Петрович...»

«ПЛУТНИЦКИЙ АНДРЕЙ НИКОЛАЕВИЧ НАУЧНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРИОРИТЕТНЫХ НАПРАВЛЕНИЙ РАЗВИТИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ТЕРРИТОРИИ 14.02.03. - общественное здоровье и здравоохранение Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва – 2014 Работа выполнена в ФГБУ Национальный НИИ общественного здоровья РАМН Научный консультант : Линденбратен Александр Леонидович доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ Зам....»

«Макаренко Виктор Григорьевич ПЕДАГОГИЧЕСКОЕ УПРАВЛЕНИЕ ФИЗКУЛЬТУРНЫМ ОБРАЗОВАНИЕМ ДЕТЕЙ ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА 13.00.02 – теория и методика обучения и воспитания (дошкольное образование) Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора педагогических наук Челябинск – 2012 Работа выполнена на кафедре Теоретических основ физической культуры в ФГБОУ ВПО Челябинский государственный педагогический университет Научный консультант : Никитина Елена Юрьевна доктор...»

«Кохичко Андрей Николаевич ТЕОРИЯ И МЕТОДИКА ЛИНГВООРИЕНТИРОВАННОГО ОБРАЗОВАНИЯ МЛАДШИХ ШКОЛЬНИКОВ 13.00.02 – теория и методика обучения и воспитания (русский язык, уровень начального образования), педагогические наук и АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора педагогических наук Челябинск – 2012 2 Работа выполнена на кафедре дошкольного и начального образования в государственном бюджетном образовательном учреждении дополнительного профессионального...»

«Уткаев Евгений Александрович ОЦЕНКА ФИЛЬТРАЦИОННЫХ СВОЙСТВ В ПРИЗАБОЙНОЙ ЗОНЕ СКВАЖИНЫ ПРИ ИЗВЛЕЧЕНИИ МЕТАНА ИЗ УГОЛЬНЫХ ПЛАСТОВ Специальность: 25.00.20 – Геомеханика, разрушение горных пород, рудничная аэрогазодинамика и горная теплофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Кемерово 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте угля Сибирского отделения Российской академии наук Научный...»

«ТУБАЛЕЦ Анна Александровна ЭКОНОМИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ РАЗВИТИЯ И ГОСУДАРСТВЕННОГО РЕГУЛИРОВАНИЯ МАЛЫХ ФОРМ ХОЗЯЙСТВОВАНИЯ В СЕЛЬСКОМ ХОЗЯЙСТВЕ (по материалам Краснодарского края) Специальность 08.00.05 – экономика и управление народным хозяйством (1.2. Экономика, организация и управление предприятиями, отраслями, комплексами: АПК и сельское хозяйство) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата экономических наук Москва – 2014 Работа выполнена в Федеральном...»

«Толстопятенко Мария Анатольевна Инновационное развитие фармацевтической промышленности на основе формирования фарма-медицинских кластеров 08.00.05 - Экономика и управление народным хозяйством Специализация - экономика, организация и управление предприятиями, отраслями, комплексами (промышленность) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата экономических наук Москва - 2009 Работа выполнена на кафедре промышленного бизнеса ГОУ ВПО Государственный университет...»






 
2014 www.av.disus.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.